QMRDD2.GyD.F4.y2.B一种一个新的玉米粗缩病定量抗性位点GyD.F4.y2.B一种

背景GyD.F4.y2.B一种

玉米粗糙矮病（MRDD），普遍疾病引起的四种致病病毒，严重降低了玉米产量和粒度。抗MRDD的抵抗是一种复杂的性状，其受许多定量性状基因座（QTL）控制，并且容易受环境条件的影响。到目前为止，许多研究报告了抗QTL的数量，然而，只克隆了一个QTL，因此映射和克隆更多赋予MRDD抗性的基因尤为重要。GyD.F4.y2.B一种

结果GyD.F4.y2.B一种

在本研究中，一个主要的数量性状位点（QTL）GyD.F4.y2.B一种QMRDD2.GyD.F4.y2.B一种赋予MRDD的抵抗，识别和精细映射。GyD.F4.y2.B一种QMRDD2.GyD.F4.y2.B一种位于染色体2上，通过使用从抗性之间的交叉（“80007”）和易感的重组近亲重复（SSR）标记D184和D1600之间以15Mb之间的间隔以15mb之间的间隔识别。（“80044”）自交系。使用重组衍生的后代测试策略，GyD.F4.y2.B一种QMRDD2.GyD.F4.y2.B一种间隔577kb，两侧有标记N31和N42。我们进一步证明了这一点GyD.F4.y2.B一种QMRDD2.GyD.F4.y2.B一种对于MRDD的抗性抵抗基因座是不完全的抗病遗迹，将疾病严重程度降低了20.4％。GyD.F4.y2.B一种

结论GyD.F4.y2.B一种

一个主要的阻力qtl（GyD.F4.y2.B一种QMRDD2.GyD.F4.y2.B一种）已被确定并成功地改进到577千克地区。通过标记辅助选择（MAS），该基因座对于改善玉米品种抗性的玉米品种抗性有价值。GyD.F4.y2.B一种

玉米粗缩病（MRDD）是一种严重的病毒性病害。MRDD由四种致病病毒引起[GyD.F4.y2.B一种1.GyD.F4.y2.B一种，即流行于欧洲的玉米粗缩病毒(MRDV)、马尔德里约热内卢Cuarto病毒(MRCV)、水稻黑条矮缩病毒(RBSDV)和南方水稻黑条矮缩病毒(SRBSDV) [GyD.F4.y2.B一种2.GyD.F4.y2.B一种]， 南美洲 [GyD.F4.y2.B一种3.GyD.F4.y2.B一种]，亚洲[GyD.F4.y2.B一种4.GyD.F4.y2.B一种]，以及中国北方[GyD.F4.y2.B一种5.GyD.F4.y2.B一种]， 分别。这些致病病毒自然地由小棕色Planthopper传播GyD.F4.y2.B一种Laodelphax Striatellus.GyD.F4.y2.B一种以持久的方式[GyD.F4.y2.B一种6.GyD.F4.y2.B一种]，不会由种子或机械接种传播。一旦感染，GyD.F4.y2.B一种L. Striatellus.GyD.F4.y2.B一种可以为寿命传递这些病毒，虽然没有发生鸡蛋的传输[GyD.F4.y2.B一种7.GyD.F4.y2.B一种］．GyD.F4.y2.B一种

MRDD在全球范围内导致玉米产量的大量产量损失[GyD.F4.y2.B一种2.GyD.F4.y2.B一种]. 事实上，在2008年至2011年期间，MRDD造成了华北地区每年300多万公顷作物的产量损失，一些严重受灾地区的产量损失达到100%[GyD.F4.y2.B一种8.GyD.F4.y2.B一种］．该病可导致植株矮化、节间缩短、蜡状突起、流苏畸形和叶片深绿色等严重症状[GyD.F4.y2.B一种9GyD.F4.y2.B一种］．控制MRDD的目前方法是农业措施（即延迟播种）和化学控制。然而，延迟播种导致光热资源的未充分利用，使脆弱的幼苗造成耐水涝和晚熟，如黄淮海河平原所发生的[GyD.F4.y2.B一种10GyD.F4.y2.B一种]. 小规模化学防治也不理想，导致环境污染。因此，克隆天然抗病基因和培育抗病玉米品种将是控制MRDD最具环境责任性和成本效益的手段。因此，收集和鉴定各种抗性种质资源将有助于玉米抗病品种的培育，而对MRDD抗性基因的定位和克隆尤为重要。GyD.F4.y2.B一种

大多数研究表明，以玉米MRDD抗性是由许多基因，每个都有不同的效果[控制GyD.F4.y2.B一种2.GyD.F4.y2.B一种,GyD.F4.y2.B一种11GyD.F4.y2.B一种,GyD.F4.y2.B一种12GyD.F4.y2.B一种］．玉米种质显示在自然条件下对MRDD的不同抗性水平不同，源自美国杂交P78599的最耐药种质[GyD.F4.y2.B一种13GyD.F4.y2.B一种,GyD.F4.y2.B一种14GyD.F4.y2.B一种,GyD.F4.y2.B一种15GyD.F4.y2.B一种,GyD.F4.y2.B一种16GyD.F4.y2.B一种］．使用F.GyD.F4.y2.B一种_{3.GyD.F4.y2.B一种}Mo17和BSL14的家族，Di Renzo等人[GyD.F4.y2.B一种17GyD.F4.y2.B一种]结果表明，在阿根廷，玉米抗MRCV的遗传力在0.44～0.56之间，以FGyD.F4.y2.B一种_{2：3GyD.F4.y2.B一种}QTL映射策略，2个定量特质基因座（QTLS）本地化为玉米染色体箱1.03和8.03 / 4 [GyD.F4.y2.B一种18GyD.F4.y2.B一种]. Luan等人[GyD.F4.y2.B一种19GyD.F4.y2.B一种]通过使用F，筛选四个连接的分子标记物并映射了三个QTL，用于染色体箱6.02,7.02和8.07的MRDDGyD.F4.y2.B一种_{2.GyD.F4.y2.B一种}源自耐血交线90,110的群体和易感近交线YE478。通过与163种近交系的关联分析，SHI检测到一种相关的单核苷酸多态性（SNP）GyD.F4.y2.B一种ZmeIF4E公司GyD.F4.y2.B一种启动子在两种环境中分别占表型变异的3.33%和9.04%[GyD.F4.y2.B一种20GyD.F4.y2.B一种]. 利用152份玉米种质分离物和89份来自抗病系X178和感病系B73的重组自交系（RIL），Shi等[GyD.F4.y2.B一种21GyD.F4.y2.B一种]在2.07、5.04和8.03号箱中检测到3个MRDD抗性QTL, 8.03号箱上的QTL解释了24.6 ~ 37.3%的表型变异。这个主要QTL (GyD.F4.y2.B一种qMrdd8GyD.F4.y2.B一种)在染色体上，8.03被施的实验室精确定位到347kb的区域[GyD.F4.y2.B一种22GyD.F4.y2.B一种]. 利用527个自交系和55.6万个SNPs，共鉴定出15个与MRDD抗性相关的候选基因[GyD.F4.y2.B一种23GyD.F4.y2.B一种]. 传统的连锁分析和高通量测序分析已被用于定位与抗性相关的基因组区域，并在基因组区间68396487内鉴定出一个相关区域 − 6号染色体69523478 bp[GyD.F4.y2.B一种24GyD.F4.y2.B一种]. 主效QTL(GyD.F4.y2.B一种QMRDD1.GyD.F4.y2.B一种）通过将重组衍生的后交的家庭应用重组衍生的后代测试将DSI减少至1.2mB区域的24.2-39.3％。GyD.F4.y2.B一种25GyD.F4.y2.B一种］．虽然已经确定了许多QTL，但很少有很少映射甚至克隆。刘等。（2020）报道了RAB GDP解离抑制剂GyD.F4.y2.B一种（Zmgdiα.GyD.F4.y2.B一种）是候选基因GyD.F4.y2.B一种QMRDD1.GyD.F4.y2.B一种对MRDD具有隐性抗性，并解决了控制病毒性疾病的潜在分子机制。GyD.F4.y2.B一种QMRDD1.GyD.F4.y2.B一种也是克隆到日期的唯一抵抗基因[GyD.F4.y2.B一种26GyD.F4.y2.B一种］．GyD.F4.y2.B一种

考虑到MRDD造成的损害以及抗病抗性的复杂性，鉴定可用于转基因MRDD的新抗性QTL和深化我们对抗性机制的理解至关重要。GyD.F4.y2.B一种

MRDD的初步QTL分析GyD.F4.y2.B一种

对于每一个田间试验，RIL群体显示连续变化在DSI（范围0-100％）中，用54.2平均值和在分别两个场试验（2013-A和2013-B）（图55.5％。GyD.F4.y2.B一种1.GyD.F4.y2.B一种一种）。Spearman的等级相关系数（GyD.F4.y2.B一种R.GyD.F4.y2.B一种_{S.GyD.F4.y2.B一种})计算两组表型数据。两个重复之间的数据显著相关（p值 = 6.74东经GyD.F4.y2.B一种^{-13GyD.F4.y2.B一种})与GyD.F4.y2.B一种R.GyD.F4.y2.B一种_{S.GyD.F4.y2.B一种}为0.49。广义遗传力(GyD.F4.y2.B一种HGyD.F4.y2.B一种^{2.GyD.F4.y2.B一种})GyD.F4.y2.B一种估计抗病抗性为0.66（表GyD.F4.y2.B一种S1级GyD.F4.y2.B一种），方差主要来自rils之间的差异（表GyD.F4.y2.B一种1.GyD.F4.y2.B一种). 这些结果表明，在RIL群体中，遗传因素在玉米对MRDD的抗性中起主要作用。GyD.F4.y2.B一种

分别于2017年和2019年在泰安和2018年在海南进行了3次人工接种，对两个玉米品系“80007”和“80044”进行了抗药性鉴定。在每个田间试验中，品系80007表现出对MRDD的有效抗性，而品系80044表现出高度的敏感性；“80007”和“80044”的平均DSI分别为34.6%和82.03%（图。GyD.F4.y2.B一种1.GyD.F4.y2.B一种b、 （三）。GyD.F4.y2.B一种

MRDD抗性QTL的初步定位GyD.F4.y2.B一种

基于199个RILS和804个信息SNP，我们构建了一种覆盖1291.05厘米的遗传联系地图，相邻标记平均为1.61厘米（图。GyD.F4.y2.B一种S1级GyD.F4.y2.B一种， 图。GyD.F4.y2.B一种S2级GyD.F4.y2.B一种，表格GyD.F4.y2.B一种S2级GyD.F4.y2.B一种和桌子GyD.F4.y2.B一种S3级GyD.F4.y2.B一种). 以199个ril的DSI为表型数据进行MRDD抗性QTL定位。在所有三个田间试验（2013-A、2013-B和2013-A和2013-B中每个RIL的平均DSI表型）中一致检测到两个QTL（图。GyD.F4.y2.B一种S3级GyD.F4.y2.B一种， 图。GyD.F4.y2.B一种S4级GyD.F4.y2.B一种和桌子GyD.F4.y2.B一种2.GyD.F4.y2.B一种）。其中一个QTL，GyD.F4.y2.B一种QMRDD2.GyD.F4.y2.B一种，位于2号染色体15mb区域内，解释为12.88 − 总表型变异的15.67%。另一个位于5号染色体上的QTL解释了这一现象 ~ 总表型变异的6%（表GyD.F4.y2.B一种2.GyD.F4.y2.B一种）。GyD.F4.y2.B一种

精细映射GyD.F4.y2.B一种QMRDD2.GyD.F4.y2.B一种

根据初始QTL分析，两个侧翼标记（D184和D1600）和一个标记居住在内GyD.F4.y2.B一种QMRDD2.GyD.F4.y2.B一种采用D829-0区(region)筛选RIL人群。最终，6个重组RILs有交叉断点GyD.F4.y2.B一种QMRDD2.GyD.F4.y2.B一种检测到区域并进一步与七个新分离的标记物（D387-2，D550，D664，D829-0，D936-2，D122-6和D1347）进行进一步基因分型（D387-2，D550，D6647）（表GyD.F4.y2.B一种S4级GyD.F4.y2.B一种）。所有六个F.GyD.F4.y2.B一种_{5.GyD.F4.y2.B一种}重组体自交产生相应的FGyD.F4.y2.B一种_{6.GyD.F4.y2.B一种}后代。2017年夏天，FGyD.F4.y2.B一种_{6.GyD.F4.y2.B一种}在泰安种植后代1010株，进行田间抗MRDD试验。每个FGyD.F4.y2.B一种_{6.GyD.F4.y2.B一种}衍生自单独杂合重组植物的后代分类：GyD.F4.y2.B一种QMRDD2.GyD.F4.y2.B一种（80007）纯合子、杂合子和非QGyD.F4.y2.B一种MRDD2.GyD.F4.y2.B一种（80044）Homozygote。计算每种基因型的DSI值。重组型A-I，A-III，A-IV，A-V和A-VI的三种基因型之间的MRDD抗性没有显着差异（GyD.F4.y2.B一种PGyD.F4.y2.B一种 < 0.05), indicating thatQMRDD2.GyD.F4.y2.B一种位于父母区的纯合区域。对于剩余的重组型A-II，统计学上显着差异（GyD.F4.y2.B一种PGyD.F4.y2.B一种 < 0.05) in MRDD resistance among the three genotypes was observed, suggesting the presence ofQMRDD2.GyD.F4.y2.B一种在亲本重组体的杂合区。这一分析表明GyD.F4.y2.B一种QMRDD2.GyD.F4.y2.B一种定位于标记D829-0和D122-6之间，物理距离为 ~ 3.9 Mb，基于B73物理地图（AGPv4）。GyD.F4.y2.B一种

在2017年冬天在海南，九件GyD.F4.y2.B一种_{7.GyD.F4.y2.B一种}在海南种植后代（603植物），设计了五种诱导标记物（A1，A10，C2，C3和C6）对基因型新重组剂设计。鉴定了十种类型的重组剂并自然授粉以产生10 fGyD.F4.y2.B一种_{8.GyD.F4.y2.B一种}利用10个标记（D550、D664、D829-0、A1、A10、C2、C3、C6、D122-6和D1347）对泰安市2018年种植的10个家系（1159株）进行基因分型（I–X；图。GyD.F4.y2.B一种2.GyD.F4.y2.B一种b）。基于统计上显着的差异（GyD.F4.y2.B一种PGyD.F4.y2.B一种 < 0.05）在“80007”和“80044”纯合子之间的DSI值中，重组子b-I、b-III和b-V被认为对MRDD具有抗性（图。GyD.F4.y2.B一种2.GyD.F4.y2.B一种b），建议GyD.F4.y2.B一种QMRDD2.GyD.F4.y2.B一种位于这些重组型的杂合子区。相比之下，重组型b-II、b-IV和b-VI−b-X没有显示统计学上的显著差异(GyD.F4.y2.B一种PGyD.F4.y2.B一种 > 0.05) in DSI between “80007” and “80044” homozygotes (Fig.2.GyD.F4.y2.B一种b），表明这一点GyD.F4.y2.B一种QMRDD2.GyD.F4.y2.B一种在纯合区。因此，GyD.F4.y2.B一种QMRDD2.GyD.F4.y2.B一种定位于2.81-Mb（AGPv4）(GyD.F4.y2.B一种http://www.maizegdb.orgGyD.F4.y2.B一种)标记A10和C3之间的间隔（图。GyD.F4.y2.B一种2.GyD.F4.y2.B一种b）。GyD.F4.y2.B一种

用来自f的标记A10和C3鉴定七种类型的重组剂GyD.F4.y2.B一种_{8.GyD.F4.y2.B一种}然后自授粉的后代产生7 fGyD.F4.y2.B一种_{9GyD.F4.y2.B一种}家庭（765个厂）。所有F.GyD.F4.y2.B一种_{9GyD.F4.y2.B一种}在2018年冬天，在海南省种植了后代。三个标记（S33，D1116和C2）在映射A10 / C3间隔内，另外七个新开发的标记（D829-0，A1，A10，C3，C6，C13和C18））应用于基因型7重组剂（图。GyD.F4.y2.B一种2.GyD.F4.y2.B一种C）。使用相同的后代测试策略来确定是否存在统计学上有显着差异（GyD.F4.y2.B一种PGyD.F4.y2.B一种 < DSI值在“80007”和“80044”纯合子之间为0.05）。c-I、c-IV和c-VI型重组子的结果表明GyD.F4.y2.B一种QMRDD2.GyD.F4.y2.B一种位于杂合子区。类似地,GyD.F4.y2.B一种QMRDD2.GyD.F4.y2.B一种本地化为C-II型，C-III，C-V和C-VII重组剂的纯合区域（图。GyD.F4.y2.B一种2.GyD.F4.y2.B一种因此,c)。GyD.F4.y2.B一种QMRDD2.GyD.F4.y2.B一种标记S33和D1116之间的物理距离为1.28-Mb（AGPv4）。GyD.F4.y2.B一种

我们于2019年夏天在泰安进行了第四次精细测绘。在新定位的1.28 mb区域开发了3个InDel标记(N37、N31和N42)，从9个重组体中获得1421个个体GyD.F4.y2.B一种_{9GyD.F4.y2.B一种}后代。d-I型、d-IV型、d-VI型和d-IX型后代表现出显著性(GyD.F4.y2.B一种PGyD.F4.y2.B一种 < 0.05) different DSI values, and types d-II, d-III, d-V, d-VII and d-VIII did not show significant differences (PGyD.F4.y2.B一种 > 0.05) in DSI. These data further allowed us to localizeQMRDD2.GyD.F4.y2.B一种到577-kB（AGPv4）由标记物N31和N42侧翼的间隔（图。GyD.F4.y2.B一种2.GyD.F4.y2.B一种d）。GyD.F4.y2.B一种

基因模型GyD.F4.y2.B一种QMRDD2.GyD.F4.y2.B一种对MRDD的抵抗力GyD.F4.y2.B一种

FGyD.F4.y2.B一种_{6.GyD.F4.y2.B一种}， FGyD.F4.y2.B一种_{8.GyD.F4.y2.B一种}和FGyD.F4.y2.B一种_{9GyD.F4.y2.B一种}家庭用于调查遗传效果GyD.F4.y2.B一种QMRDD2.GyD.F4.y2.B一种.纯合“80007”/“80007”的植物，杂合“80007”/“/”80044“和纯合”80044“/”80044“基因型在2017年泰安的DSIS显示为30.94,43.35和51.48％，2018年泰安，40.62,52.28和66.23％分别于2018年海南。对于每个实地试验，纯合“80044”/“80044”植物在纯合“80007”/“80007”植物中显示出DSI的明显差异，平均差异为20.4％。杂合植物的DSI平均比纯合的“80007”/“80007”植物大的12.17％大（图。GyD.F4.y2.B一种3.GyD.F4.y2.B一种). 这些结果表明GyD.F4.y2.B一种QMRDD2.GyD.F4.y2.B一种QTL以不完全显性方式对MRDD产生抗性。GyD.F4.y2.B一种

重组衍生的后代测试是一种有效的方法，通常用于检测回交群体中的QTL，例如GyD.F4.y2.B一种QRFG2.GyD.F4.y2.B一种和GyD.F4.y2.B一种问题4GyD.F4.y2.B一种[GyD.F4.y2.B一种27GyD.F4.y2.B一种,GyD.F4.y2.B一种28GyD.F4.y2.B一种,GyD.F4.y2.B一种29GyD.F4.y2.B一种]. 与回交子代相比，自交子代能捕获三种基因型的效应，创造更多的重组子进行精细定位。然而，如果重组体在两个侧翼标记上都是纯合的，那么通过自花授粉产生的重组体就不能用于精细作图。与同一家系中的其它杂合植物杂交可以很好地解决这一问题。GyD.F4.y2.B一种

人工感染过程[GyD.F4.y2.B一种30GyD.F4.y2.B一种]用于评价个体植物的本研究中的MRDD电阻，其中足够带毒稻飞虱携带RBSDV提供稳定和均匀的病害压力。在2017年，在海南，由于幼苗时代与跖舱不一致，当种子萌芽时，跖舱均陈旧。结果，Planthopper活性不足以评估大多数重组单个表型。在2019年春天，F的抗病表型GyD.F4.y2.B一种_{9GyD.F4.y2.B一种}种群没有以前的实验那么健壮，这可能是苗期严重寒潮造成的。由于第一次对病害症状的调查是在接种后40天进行的，因此可以在受害最严重的植物死亡前对其进行分析，然后在授粉后每隔10天进行第二次和第三次调查，以确保表型数据的一致性。GyD.F4.y2.B一种

我们之前鉴定了一个主要抗性QTL (GyD.F4.y2.B一种QMRDD1.GyD.F4.y2.B一种在高抗自交系NT411和X178的chr.8上[GyD.F4.y2.B一种25GyD.F4.y2.B一种]. 在chr.1、2、5、6和7上还发现了其他抗性qtl[GyD.F4.y2.B一种19GyD.F4.y2.B一种,GyD.F4.y2.B一种24GyD.F4.y2.B一种,GyD.F4.y2.B一种31GyD.F4.y2.B一种,GyD.F4.y2.B一种32GyD.F4.y2.B一种]. 本研究利用一个不同的抗性自交系（80007），检测到另一个主效QTL(GyD.F4.y2.B一种QMRDD2.GyD.F4.y2.B一种，Chr.2，Bin 2.01 / 02）并将其本地化为〜577 kB的间隔。预先映射到CHR.2（BIN 2.07 / 08）的电阻QTL [GyD.F4.y2.B一种8.GyD.F4.y2.B一种]显然是不同的GyD.F4.y2.B一种QMRDD2.GyD.F4.y2.B一种（箱2.01/02）。也，GyD.F4.y2.B一种QMRDD2.GyD.F4.y2.B一种可以在关联映射的背景下，通过探索一组通常包含来自一个或多个种质的巨大多样性的种质来验证。GyD.F4.y2.B一种

在这项研究中，GyD.F4.y2.B一种QMRDD2.GyD.F4.y2.B一种缩小到〜577 kB区域（APV 4）。Fegnesh 2.6的基因预测（GyD.F4.y2.B一种http://linux1.softberry.com/berry.phtmlGyD.F4.y2.B一种)发现了29个可能存在的基因GyD.F4.y2.B一种QMRDD2.GyD.F4.y2.B一种地区。大多数基因尚未注释，只有一个（GyD.F4.y2.B一种Zm00001d002312GyD.F4.y2.B一种）与抗病抗性有关。基因GyD.F4.y2.B一种Zm00001d002312GyD.F4.y2.B一种被注释为富含亮氨酸的重复跨膜蛋白激酶（LRR-TM），并且LRR-TM基因是植物中的重要受体抗性基因，响应病原体感染[GyD.F4.y2.B一种33GyD.F4.y2.B一种］．两个都GyD.F4.y2.B一种CF-2GyD.F4.y2.B一种和GyD.F4.y2.B一种HcrVf2型GyD.F4.y2.B一种这种类型的基因与抗性有关GyD.F4.y2.B一种黄枝孢GyD.F4.y2.B一种在番茄和GyD.F4.y2.B一种痂GyD.F4.y2.B一种在Apple [GyD.F4.y2.B一种34GyD.F4.y2.B一种,GyD.F4.y2.B一种35GyD.F4.y2.B一种]， 分别。尽管GyD.F4.y2.B一种Zm00001d002312GyD.F4.y2.B一种是一个很好的候选基因GyD.F4.y2.B一种QMRDD2.GyD.F4.y2.B一种进一步的实验，如通过基因图谱筛选出新的重组体GyD.F4.y2.B一种QMRDD2.GyD.F4.y2.B一种必须进行基因座或基因表达和转基因测试研究以限制GyD.F4.y2.B一种QMRDD2.GyD.F4.y2.B一种一个基因位点。GyD.F4.y2.B一种

因为GyD.F4.y2.B一种QMRDD2.GyD.F4.y2.B一种是一个不完全显性抗性QTLGyD.F4.y2.B一种QMRDD2.GyD.F4.y2.B一种捐助区应通过MAS整合到父母中，以确保最大抗性F.GyD.F4.y2.B一种_{1.GyD.F4.y2.B一种}混血儿。然而，鉴于来自两个亲本系的纯合片段会损害杂种优势，因此必须尽量减少重叠GyD.F4.y2.B一种QMRDD2.GyD.F4.y2.B一种地区GyD.F4.y2.B一种_{1.GyD.F4.y2.B一种}杂交成功的分子育种。我们建议一个亲本携带最短的可能GyD.F4.y2.B一种QMRDD2.GyD.F4.y2.B一种左侧的供体区，而另一个父母线携带最短GyD.F4.y2.B一种QMRDD2.GyD.F4.y2.B一种施主区域通过MAS右侧，以最小化这种重叠。因此，开发合适的标记以确定最短的标记GyD.F4.y2.B一种QMRDD2.GyD.F4.y2.B一种捐助区最小化这种重叠具有重要意义。在本研究中，标记N31和N42之间的遗传距离为约0.67厘米。因此，它们对于MRDD电阻的MA可以是有效的，因为该标记紧密地连接在QTL的5cm内[GyD.F4.y2.B一种36GyD.F4.y2.B一种］．GyD.F4.y2.B一种

因此，寻找新的抗性qtl对MRDD的遗传控制和深入了解MRDD的抗性机制具有重要意义。由于RIL群体的存在，我们在这里检测到了一些一致的MRDD QTL。利用重组衍生后代检测策略，构建了一个主效抗性QTL(GyD.F4.y2.B一种QMRDD2.GyD.F4.y2.B一种)已被识别并成功细化为577kb区域。我们进一步证明了这一点GyD.F4.y2.B一种QMRDD2.GyD.F4.y2.B一种对于MRDD的抗性抵抗基因座是不完全的抗病遗迹，将疾病严重程度降低了20.4％。该基因座对于通过MAS改善对MRDD的玉米品种抗性有价值。GyD.F4.y2.B一种

植物材料GyD.F4.y2.B一种

在本研究中使用了由来自近交系与“80044”和“80007”之间的交叉开发的单种子血管开发的199条线。“80044”是一种从内德异解组繁殖的敏感线，“80007”是来自P yeratics组的抗性线。这两个父母以及罗利都是由山东农业大学的宝仁刘教授制定的。对于2013年的初始QTL映射，我们将199个RILS作为在实验站（山东省济宁）进行两次实地试验（2013-A和2013-B）的初始QTL映射人口。对于每个Ril，在一排中播种30个种子，间距为0.6米，在行之间的植物之间的0.25米。对于精细的映射，选择QTL区域中具有不同染色体重组的58个抗性ril，并用易感线“80044”来制作F.GyD.F4.y2.B一种_{1.GyD.F4.y2.B一种}人口。使用标记辅助选择（MAS），FGyD.F4.y2.B一种_{1.GyD.F4.y2.B一种}与目的QTL的杂种进行4次自交，获得一个FGyD.F4.y2.B一种_{5.GyD.F4.y2.B一种}人口;所有映射群体是基于图1中所示的实验流程图开发的。GyD.F4.y2.B一种4.GyD.F4.y2.B一种. 所有群体均生长在山东农业大学（泰安，山东省）和实验基地（海南省，三亚）的实验站进行精细定位。为了比较，我们在每个精细定位中种植了两个亲本，所有种群和两个亲本系都人工接种了含病毒的稻飞虱（见下文）。GyD.F4.y2.B一种

主要QTL区域内的分子标记用于鉴定来自F的重组剂GyD.F4.y2.B一种_{5.GyD.F4.y2.B一种}人口，重组剂是自我授粉的，以产生fGyD.F4.y2.B一种_{6.GyD.F4.y2.B一种}后代。这一过程在2017-2019年间被重复，以发展一系列由1010 FGyD.F4.y2.B一种_{6.GyD.F4.y2.B一种}，603 fGyD.F4.y2.B一种_{7.GyD.F4.y2.B一种}，1159 F.GyD.F4.y2.B一种_{8.GyD.F4.y2.B一种}，765 F.GyD.F4.y2.B一种_{9GyD.F4.y2.B一种}和1421 f.GyD.F4.y2.B一种_{10GyD.F4.y2.B一种}植物精细制图GyD.F4.y2.B一种QMRDD2.GyD.F4.y2.B一种. 在完成目标QTL的精细定位之前，对自花授粉群体进行MAS和后代检测。GyD.F4.y2.B一种

人工接种与植物症状评分GyD.F4.y2.B一种

携带RBSDV的Planthoppers由江苏农业科学院（南京）提供[中国）[GyD.F4.y2.B一种37GyD.F4.y2.B一种］．在接种之前，将衍生自一个重组植物的玉米核置于塑料壳体中，并达到DOT-ELISA [GyD.F4.y2.B一种38GyD.F4.y2.B一种]检测飞虱的侵染率。在胚芽期接种1株感染飞虱的幼苗[GyD.F4.y2.B一种39GyD.F4.y2.B一种]在24℃下在温室中培养72小时;种植幼苗在植物之间的0.3-m间距和行之间的0.6-m间距之间种植幼苗。GyD.F4.y2.B一种

症状评分在接种后40天进行，并在10天间隔后重复两次。用于QTL分析和精细定位，评分系统（0，0.25，0.5,0.75或1）的基础上整体症状获得通过评估MRDD电阻（图GyD.F4.y2.B一种5.GyD.F4.y2.B一种)，如下:0 =无症状;0.25 =较短的上位节间，植株高度约为健康植株高度的80%;0.5 =叶片深绿色，叶片和叶鞘背面蜡质突起，上节间明显缩短，植株高度约为健康植株的66%;0.75 =节间严重缩短和雄穗畸形，导致植株高度约为健康植株高度的50%;1 =严重发育不良，抑制开花和无穗，导致植株高度小于健康植株高度的50%。DSI的计算公式如下:DSI(%) =∑[(尺度×尺度上的植物数量)/ (1 ×总植物数量)]× 100%，用来表示科系的MRDD严重程度[GyD.F4.y2.B一种40GyD.F4.y2.B一种］．GyD.F4.y2.B一种

表型数据分析GyD.F4.y2.B一种

采用R项目进行统计分析[GyD.F4.y2.B一种39GyD.F4.y2.B一种]. 为RIL群体和Spearman秩相关系数收集了两组表型数据（2013-A，2013-B）(GyD.F4.y2.B一种R.GyD.F4.y2.B一种_{S.GyD.F4.y2.B一种}）计算。我们使用了ANOVA（R项目的一部分）来测试基因型和环境影响的重要性。方差分析模型如下：GyD.F4.y2.B一种yGyD.F4.y2.B一种_{一世GyD.F4.y2.B一种} = μ.GyD.F4.y2.B一种+GyD.F4.y2.B一种GI.GyD.F4.y2.B一种+GyD.F4.y2.B一种ej.GyD.F4.y2.B一种+GyD.F4.y2.B一种ε.GyD.F4.y2.B一种，其中GyD.F4.y2.B一种yGyD.F4.y2.B一种_{一世GyD.F4.y2.B一种}是表型的表型GyD.F4.y2.B一种一世GyD.F4.y2.B一种里尔线，GyD.F4.y2.B一种μ.GyD.F4.y2.B一种是总体平均值，GyD.F4.y2.B一种GI.GyD.F4.y2.B一种基因效应GyD.F4.y2.B一种一世GyD.F4.y2.B一种ril，GyD.F4.y2.B一种ej.GyD.F4.y2.B一种环境效果GyD.F4.y2.B一种jGyD.F4.y2.B一种审判和GyD.F4.y2.B一种ε.GyD.F4.y2.B一种是残余的。ANOVA结果用于计算广义遗传性（GyD.F4.y2.B一种HGyD.F4.y2.B一种^{2.GyD.F4.y2.B一种} = σ.GyD.F4.y2.B一种_{GGyD.F4.y2.B一种}^{2.GyD.F4.y2.B一种}/GyD.F4.y2.B一种σ.GyD.F4.y2.B一种_{GGyD.F4.y2.B一种}^{2.GyD.F4.y2.B一种}+GyD.F4.y2.B一种σ.GyD.F4.y2.B一种_{ε.GyD.F4.y2.B一种}^{2.GyD.F4.y2.B一种}/GyD.F4.y2.B一种E.GyD.F4.y2.B一种)，在哪里GyD.F4.y2.B一种σ.GyD.F4.y2.B一种_{GGyD.F4.y2.B一种}^{2.GyD.F4.y2.B一种}是遗传方差，GyD.F4.y2.B一种σ.GyD.F4.y2.B一种_{ε.GyD.F4.y2.B一种}^{2.GyD.F4.y2.B一种}是残余错误，还有GyD.F4.y2.B一种E.GyD.F4.y2.B一种是环境的数量[GyD.F4.y2.B一种41GyD.F4.y2.B一种,GyD.F4.y2.B一种42GyD.F4.y2.B一种］．GyD.F4.y2.B一种

Student’s t-test was performed in QTL fine-mapping study to compare the difference in DSI between the two parent lines “80007” and “80044” and the three genotypes (“80007”/”80007”, “80007”/”80044” and “80044”/”80044”) in self-pollinated populations.

联动地图构建和检测QTL的抵抗力GyD.F4.y2.B一种

使用Illumina Golden Gate 3 K SNP芯片收集RIL群体的基因型数据。我们获得了来自Illumina Golden Gate 3 K SNP芯片的3072个SNP标记，并应用了六个标准来分析SNP数据库（表GyD.F4.y2.B一种S5级GyD.F4.y2.B一种）。基于这些基因型数据，我们使用JoinMap（版本2.5）[GyD.F4.y2.B一种43GyD.F4.y2.B一种]构建遗传联系地图和Kosambi映射功能[GyD.F4.y2.B一种44GyD.F4.y2.B一种]计算遗传距离。QTL分析在Windows QTL制图器（2.5版）中进行[GyD.F4.y2.B一种45GyD.F4.y2.B一种]复合间隔映射方法[GyD.F4.y2.B一种46GyD.F4.y2.B一种，行走速度为2.0厘米，窗口大小为10厘米。对于每个数据集(R1、R2和Average)，通过P < 0.05和对数比值> 2.5的1000排列检验得到一个确定假定QTL的显著性阈值[GyD.F4.y2.B一种47GyD.F4.y2.B一种］．GyD.F4.y2.B一种

基因分型GyD.F4.y2.B一种

在6 ~ 7叶期采集田间各植株的叶片组织。SDS程序[GyD.F4.y2.B一种48GyD.F4.y2.B一种]用于提取基因组DNA。玉米插入或删除（Indel）和SSR标记从MaizeGDB中检索（GyD.F4.y2.B一种http://www.maizegdb.org/GyD.F4.y2.B一种）;引物由Sangon Biotech（中国上海）生产。根据需要使用标记物对每个样品进行基因分型，并且PCR产物通过1％琼脂糖凝胶或6％聚丙烯酰胺凝胶电泳分离。GyD.F4.y2.B一种

PCR标记技术的研究进展GyD.F4.y2.B一种

基于初始QTL分析，GyD.F4.y2.B一种QMRDD2.GyD.F4.y2.B一种被映射到D184和D1600之间的置信域，该置信域基于B73物理图（AGPv4）覆盖了15MB的物理距离。因此，我们用高密度分子标记使该区域饱和。基于不同的序列变异开发了两类标记，包括SSRs和InDels。为了开发SSR标记，我们从网站上下载了QTL区域的玉米B73参考序列GyD.F4.y2.B一种http://plants.ensembl.org/Zea_mays/Info/Index/GyD.F4.y2.B一种.SSRHUNTER（1.3版）扫描序列以搜索SSR，并使用PRIMERQUEST工具设计了SSR的底漆（GyD.F4.y2.B一种https://sg.idtdna.com/Primerquest/Home/IndexGyD.F4.y2.B一种）。为了开发indel标记，通过清音生物技术（北京，中国）对线“80007”和“80044”，分析了QTL的15 MB间隔内的诱导。用B73基因组序列数据库通过Blast对单次/低拷贝序列进行检测到。针对≥3bp的诱导调查爆炸结果，其被检测为两个父母的序列的对准中的3-bp间隙。通过PCR评估具有≥1000bp≥1000bp和≥1000bp的下游序列的诱导。引物由引物输入设计（GyD.F4.y2.B一种https://primer3.ut.ee.GyD.F4.y2.B一种)与目标(970,60)。所有引物均符合以下标准:~ 20个核苷酸，GC含量40-60%，无单个核苷酸连续束，无二级结构。最终发现21个标记(10个SSRs和11个indel)在亲本品系之间存在多态性(表1)GyD.F4.y2.B一种S4级GyD.F4.y2.B一种）。GyD.F4.y2.B一种

微绘制的策略GyD.F4.y2.B一种QMRDD2.GyD.F4.y2.B一种

适当的标记密度，交叉密度和确定每种重组的精确表型的能力对于精细的映射分析至关重要。基于初始QTL映射，我们在15 MB间隔内开发了高密度标记GyD.F4.y2.B一种QMRDD2.GyD.F4.y2.B一种. 序列精细映射GyD.F4.y2.B一种QMRDD2.GyD.F4.y2.B一种通过使用重组衍生的后代进行[GyD.F4.y2.B一种27GyD.F4.y2.B一种］．在该研究中，采用鲁棒的后代测试策略来评估所有重组剂的MRDD表型（图。GyD.F4.y2.B一种4.GyD.F4.y2.B一种）。DSI用于表示MRDD严重性，如前所述（图。GyD.F4.y2.B一种5.GyD.F4.y2.B一种). 从FGyD.F4.y2.B一种_{NGyD.F4.y2.B一种}种群进行自花授粉，得到的自花授粉种群在同一试验站人工感染下生长。每个个体使用其亲本重组体杂合区的标记进行基因分型，并对疾病严重程度进行现场评分。估计每个自交种群的DSI值。将每个重组菌株的子代分为三个基因型：“80007”纯合子、“80044”纯合子和“80007”/“80044”杂合子。每个基因型的DSI值的统计显著性差异是通过双尾Student's检验确定的GyD.F4.y2.B一种T.GyD.F4.y2.B一种-测试。如果有显着差异（GyD.F4.y2.B一种PGyD.F4.y2.B一种 < 两个纯合基因型之间的DSI值为0.05），GyD.F4.y2.B一种QMRDD2.GyD.F4.y2.B一种被认为位于'80007'捐赠部分，即在亲本重组的杂合区域中。如果没有显着差异（GyD.F4.y2.B一种PGyD.F4.y2.B一种≥0.05)。GyD.F4.y2.B一种QMRDD2.GyD.F4.y2.B一种假设在“80007”供体片段中缺失，即在亲本重组体的纯合区，或没有GyD.F4.y2.B一种QMRDD2.GyD.F4.y2.B一种现在。GyD.F4.y2.B一种

序列数据可从合理请求的相应作者获得。本研究中产生的其他数据包含在我们的文章和其补充文件中。GyD.F4.y2.B一种

MRDD：GyD.F4.y2.B一种

玉米粗缩病GyD.F4.y2.B一种

QTL：GyD.F4.y2.B一种

定量特质基因座GyD.F4.y2.B一种

SSR：GyD.F4.y2.B一种

简单序列重复GyD.F4.y2.B一种

里尔：GyD.F4.y2.B一种

重组自交系GyD.F4.y2.B一种

马斯：GyD.F4.y2.B一种

标记辅助选择GyD.F4.y2.B一种

最大残留量：GyD.F4.y2.B一种

玉米粗缩病毒GyD.F4.y2.B一种

MRCV编号：GyD.F4.y2.B一种

Cuarto病毒GyD.F4.y2.B一种

SRBSDV：GyD.F4.y2.B一种

南方大米黑色条纹的矮人病毒GyD.F4.y2.B一种

indel：GyD.F4.y2.B一种

插入或删除GyD.F4.y2.B一种

不适用。GyD.F4.y2.B一种

这项工作由中国国家科学基金会（2016YFD0101803至BL）的国家重点研发方案（31973950至BL）共同资助，山东改善了各种计划（2019LZGC002和2017LZGC005至BL）。GyD.F4.y2.B一种

从属关系GyD.F4.y2.B一种

1. 山东农业大学作物生物学国家重点实验室，泰安大安街61号，271018，中华人民共和国GyD.F4.y2.B一种

   威越张，闫昭，魏旭，永忠张＆宝森刘GyD.F4.y2.B一种

2. 中国农业大学国家玉米改良中心，中华人民共和国市北京西圆明园路2号，100193GyD.F4.y2.B一种

   邓遂宁，刘庆才，徐明亮GyD.F4.y2.B一种

3. 江苏农业科学院植物保护研究所，南京，中华人民共和国210014GyD.F4.y2.B一种

   Chunmei Ren＆Zhaobang ChengGyD.F4.y2.B一种

贡献GyD.F4.y2.B一种

WXZ执行了大部分实验并写了论文。SND和QCL进行了初始QTL映射，玉米栽培和授粉。YZ进行人工接种，表型评估和授粉。WX进行人工接种，授粉和基因分型。YZZ参与了表型评估和授粉。MLX引导实验，也参与了结果的分析。CMR和ZBC提供了棕色Planthopper。BSL设计和监督实验并提供了RIL人口。BSL编辑并修订了稿件。所有作者阅读并认可的终稿。GydF4y2Ba

通讯作者GyD.F4.y2.B一种

对应于GyD.F4.y2.B一种宝仁刘GyD.F4.y2.B一种.GyD.F4.y2.B一种

道德认可和参与同意GyD.F4.y2.B一种

不适用。GyD.F4.y2.B一种

同意出版物GyD.F4.y2.B一种

不适用。GyD.F4.y2.B一种

相互竞争的利益GyD.F4.y2.B一种

提交人声明他们没有竞争利益。GyD.F4.y2.B一种

出版商的注意事项GyD.F4.y2.B一种

斯普林格自然保持中立，就管辖权的要求，在出版的地图和机构的联系。GyD.F4.y2.B一种

开放存取GyD.F4.y2.B一种本文根据创意公约归因于4.0国际许可证，这允许在任何中或格式中使用，共享，适应，分发和复制，只要您向原始作者和来源提供适当的信贷，提供了一个链接到Creative Commons许可证，并指出是否进行了更改。除非信用额度另有说明，否则本文中的图像或其他第三方材料包含在文章的创造性公共许可证中，除非信用额度另有说明。如果物品不包含在物品的创造性的公共许可证中，法定规定不允许您的预期用途或超过允许使用，您需要直接从版权所有者获得许可。要查看本许可证的副本，请访问GyD.F4.y2.B一种http://creativecommons.org/licenses/by/4.0/GyD.F4.y2.B一种. 知识共享公共领域放弃(GyD.F4.y2.B一种http://creativecommons.org/publicdomain/zero/1.0/GyD.F4.y2.B一种)适用于本条提供的数据，除非信用额度中另有规定。GyD.F4.y2.B一种

再版和权限GyD.F4.y2.B一种