氮转移的生理和分子机制gydF4y2Ba桉树gydF4y2Ba和gydF4y2Ba达伯利亚奥多拉gydF4y2Ba根系蛋白质组学的间作系统gydF4y2Ba

背景gydF4y2Ba

的混合gydF4y2Ba桉树gydF4y2Ba用ngydF4y2Ba_2gydF4y2Ba- 混合树种（NFT）是一种经常成功和可持续的种植实践。在该研究中，我们评估了氮气（n）转移并进行了幼苗的蛋白质组学分析gydF4y2Ba桉树尿尿gydF4y2Ba×gydF4y2Ba大肠茅gydF4y2Ba（gydF4y2Ba桉树gydF4y2Ba)和非功能性测试，gydF4y2Ba达伯利亚gydF4y2Ba（gydF4y2BaD。gydF4y2Ba）gydF4y2Baodorifera，gydF4y2Ba从间作和单裂化系统来阐明混合中N转移的生理效果和分子机制gydF4y2Ba桉树gydF4y2Ba和gydF4y2Bad . odoriferagydF4y2Ba系统。gydF4y2Ba

结果gydF4y2Ba

n转移发生gydF4y2Bad . odoriferagydF4y2Ba来gydF4y2Ba桉树gydF4y2Ba在间作系统中以14.61％的速度增加，增加了N的吸收和增长gydF4y2Ba桉树gydF4y2Ba但抑制了增长gydF4y2Bad . odorifera。gydF4y2Ba有285％和288次差异表达蛋白质，蛋白质大于1.5倍gydF4y2Ba桉树gydF4y2Ba和gydF4y2Bad . odoriferagydF4y2Ba间作与单作的根系分别。引入gydF4y2Bad . odoriferagydF4y2Ba增加了应力阻力能力gydF4y2Ba桉树gydF4y2Ba， 尽管gydF4y2Bad . odoriferagydF4y2Ba通过增加茉莉酸（Ja）水平增加应力抗性。另外，上调N代谢的差异表达的N代谢蛋白，例如谷氨酰胺合成酶结节同工酶（GS）以增强N竞争gydF4y2Ba桉树gydF4y2Ba．重要的是，更多的蛋白质参与合成途径而不是代谢途径gydF4y2Ba桉树gydF4y2Ba由于N转移的好处，两组N复合转运体均发现gydF4y2Ba桉树gydF4y2Ba;然而，更多的功能蛋白质参与代谢降解gydF4y2Bad . odoriferagydF4y2Ba;具体而言，N的转移来自的分子机制gydF4y2Bad . odoriferagydF4y2Ba来gydF4y2Ba桉树gydF4y2Ba用蛋白质组学解释。gydF4y2Ba

结论gydF4y2Ba

我们的研究表明，N转移发生了gydF4y2Bad . odoriferagydF4y2Ba来gydF4y2Ba桉树gydF4y2Ba并受到差异表达蛋白变化的影响。我们期望这些结果能够在田间试验中得到验证，为可持续发展提供依据gydF4y2Ba桉树gydF4y2Ba种植园。gydF4y2Ba

虽然种植园仅占森林总面积的5％，但它们满足了超过33％的木材产品需求，预计将在未来几十年中提高急剧增加[gydF4y2Ba1gydF4y2Ba］．gydF4y2Ba桉树gydF4y2Ba广泛种植在热带和亚热带，是纸浆和纸张以及纸张以及生物遗料行业最重要的快速生长树木之一gydF4y2Ba2gydF4y2Ba，不仅在中国的亚热带地区，而且在全世界都是如此。这棵树覆盖了中国460万公顷的土地[gydF4y2Ba3.gydF4y2Ba］．而gydF4y2Ba桉树gydF4y2Ba被认为具有很高的商业价值，其缺点包括连续轮作的高水平氮(N)、磷和水消耗，所有这些都会降低生产率[gydF4y2Ba4gydF4y2Ba］．发生这种现象是因为N可用性通常是一个因子限制gydF4y2Ba桉树gydF4y2Ba增长(gydF4y2Ba5gydF4y2Ba，并可能需要额外的氮输入，以确保高产和可持续的林分生产。因此，商品桉树人工林经常使用化肥，但外源氮的利用率很低，仅为30%左右[gydF4y2Ba6gydF4y2Ba］．在每6-7年的收获期间，高水平的氮出口导致了对这些种植园的经济可持续性的担忧，目前的造林实践导致大多数商业桉树种植园的氮输出高于氮输入[gydF4y2Ba7gydF4y2Ba]，费用昂贵，并可能导致水体富营养化或其他类型的污染[gydF4y2Ba8gydF4y2Ba，gydF4y2Ba9gydF4y2Ba］．因此，应该利用自然生态系统中维持生产力的生态机制[gydF4y2Ba10gydF4y2Ba]，如果森林管理人员能够克服实施混合种植的困难，那么产量的轻微下降就值得减少肥料成本[gydF4y2Ba1gydF4y2Ba，gydF4y2Ba9gydF4y2Ba］．gydF4y2Ba

介绍N.gydF4y2Ba_2gydF4y2Ba-固定树种(nft)gydF4y2Ba桉树gydF4y2Ba种植园可能是维持高收益率的有吸引力的选择[gydF4y2Ba11gydF4y2Ba，结合了非氮碳纳米管与非氮碳纳米管之间的促进作用的生态过程gydF4y2Ba_2gydF4y2Ba- 用大气压的生物固定产生的大n个输入（非NFT）的混合树种（非NFT）gydF4y2Ba_2gydF4y2Ba［gydF4y2Ba8gydF4y2Ba，gydF4y2Ba9gydF4y2Ba];此外，该策略可能是一种通过氮平衡土壤氮收支和提高土壤氮有效性的有效途径gydF4y2Ba_2gydF4y2Ba固定及氮的循环利用[gydF4y2Ba12gydF4y2Ba］．许多实验证实，与桉树单一栽培相比，具有NFT的混合种植园具有增加木材生产的潜力[gydF4y2Ba1gydF4y2Ba，gydF4y2Ba13gydF4y2Ba，gydF4y2Ba14gydF4y2Ba］．阳性相互作用可能有助于提高与NFTS的混合物种种植园中的展台生产力[gydF4y2Ba1gydF4y2Ba，gydF4y2Ba3.gydF4y2Ba，gydF4y2Ba15gydF4y2Ba]和互补性，当差异竞争低于惯性竞争时，混合物中物种之间资源需求的差异导致了改善了立式水平的可用资源的使用[gydF4y2Ba16gydF4y2Ba］．氮的可用性可能会增加gydF4y2Ba桉树gydF4y2Ba以三种方式在与NFTS混合中生长。首先，n被植物和微生物组织的死亡和NFT的分解释放，并可获得gydF4y2Ba桉树gydF4y2Ba通过生态系统的N循环[gydF4y2Ba17gydF4y2Ba］．其次，nft固氮提高了土壤氮有效性，缓解了氮限制，促进了目标物种在氮限制土壤中的生长[gydF4y2Ba9gydF4y2Ba，gydF4y2Ba18gydF4y2Ba，因此更多的土壤氮可以用于gydF4y2Ba桉树gydF4y2Ba［gydF4y2Ba3.gydF4y2Ba，gydF4y2Ba15gydF4y2Ba］．第三，混合gydF4y2Ba桉树gydF4y2Ba并且NFT主要通过N转移来改变N利用机制。gydF4y2Ba

对提高氮利用率的前两种途径进行了大量的研究gydF4y2Ba桉树gydF4y2Ba和非功能性测试gydF4y2Ba19gydF4y2Ba，gydF4y2Ba20.gydF4y2Ba]但还进行了对N转移来改善N内容的研究[gydF4y2Ba3.gydF4y2Ba，gydF4y2Ba15gydF4y2Ba］．迄今为止，对氮转移的研究主要集中在树木生长、植物生物量、养分含量和氮转移对生物固氮的影响上gydF4y2Ba桉树gydF4y2Ba和nft种植园[gydF4y2Ba1gydF4y2Ba，gydF4y2Ba3.gydF4y2Ba，gydF4y2Ba11gydF4y2Ba]，ñ之间的机制gydF4y2Ba桉树gydF4y2BaNFT仍然明白。据认为，从大气中衍生的N可以通过根渗出或通过常见的菌根网络直接转移来迅速可用于非NFT [gydF4y2Ba21gydF4y2Ba]并且根系系统可以充当透射工具以实现地下的N转移。然而，关于混合系统中根系中的分子机制的研究gydF4y2Ba桉树gydF4y2Ba缺乏NFT，植物根系蛋白质组学的变化对于林业系统中植物生理代谢的可持续发展至关重要，间接影响植物生物产量。因此，阐明了根本开发和功能的分子机制对于改善植物生产率是重要的[gydF4y2Ba22gydF4y2Ba］．gydF4y2Ba

在过去的十年中，管理已被证明会影响下层土壤的根系活动，蛋白质组学已成为解决植物生物、非生物、生理和生化过程的常用工具[gydF4y2Ba23gydF4y2Ba］．蛋白质组学策略已成为强大的工具，[gydF4y2Ba24gydF4y2Ba[结合互补分子遗传学和生理分析时，可以提供一种了解复杂生物过程的分子基础的框架[gydF4y2Ba25gydF4y2Ba］．然而，大多数研究报道根系形态对异质养分供应和洪水的响应[gydF4y2Ba26gydF4y2Ba或对环境压力的反应[gydF4y2Ba27gydF4y2Ba，gydF4y2Ba28gydF4y2Ba]，如铁足充足/缺乏条件[gydF4y2Ba29gydF4y2Ban营养压力[gydF4y2Ba30.gydF4y2Ba干旱胁迫[gydF4y2Ba31gydF4y2Ba]温度变化[gydF4y2Ba32gydF4y2Ba，是影响根系生理代谢的主要因素。此外，在间作系统(如玉米/花生)中已报道了一些根系蛋白质组学研究[gydF4y2Ba33gydF4y2Ba]和豆子(gydF4y2Ba维亚比亚法瓦gydF4y2Ba/玉米[gydF4y2Ba34gydF4y2Ba］．然而，对氮吸收的蛋白质组学研究gydF4y2Ba桉树gydF4y2Ba缺乏混合种植园，因为难以解决木质植物混合系统中的生态问题。因此，我们假设混合的产量gydF4y2Ba桉树gydF4y2Ba差异表达蛋白对NFTs也有影响。gydF4y2Ba

E. Urophylla×E. GrandisgydF4y2Ba和一个nft，gydF4y2Ba达伯利亚奥多拉gydF4y2Ba本研究采用间作和单作两种栽培方式。两种植物间作与单作处理的差异是由根际效应造成的。以阐明其分子基础gydF4y2BaE. Urophylla×E. GrandisgydF4y2Ba和gydF4y2Bad . odoriferagydF4y2Ba间作制度下，两种植物在相同的土壤条件下种植。叶面gydF4y2Ba^15gydF4y2Ba利用N标记检测N转移，并利用TMT/iTRAQ标记检测两种不同种植体系下根中几种N代谢基因的表达水平。实验的目的是(1)来验证这两个物种的竞争优势对N吸收和转移的间作系统,(2)研究的影响差异表达蛋白质和蛋白质合成和代谢途径对N转移。gydF4y2Ba

根系形态、氮的吸收和转移gydF4y2Ba

结果表明，与单株栽培相比，单株栽培的根长、表面积、干物质积累量和氮含量均显著增加gydF4y2BaE. Urophylla.gydF4y2Ba×gydF4y2Ba大肠茅gydF4y2Ba在间作系统中，分别显着提高了25.93,18.22,45.09和75.19％。然而，这些参数下降11.12,11.42,26.43和28.48％gydF4y2Bad . odoriferagydF4y2Ba分别（图。gydF4y2Ba1gydF4y2Baa, b, c, d, e和f)。gydF4y2Ba^15gydF4y2Ba检测到两种物种中的N原子％（图。gydF4y2Ba2gydF4y2Baa和b)，我们发现N转移发生在gydF4y2Bad . odoriferagydF4y2Ba来gydF4y2BaE. Urophylla.gydF4y2Ba×gydF4y2Ba大肠茅gydF4y2Ba以14.61%的速率，相当于150.62 mg的N从gydF4y2Bad . odoriferagydF4y2Ba来gydF4y2BaE. Urophylla.gydF4y2Ba×gydF4y2Ba大肠茅gydF4y2Ba(无花果。gydF4y2Ba2gydF4y2Bac和d)。gydF4y2Ba

蛋白质组分析显示有差异表达的蛋白gydF4y2Ba

我们的结果表明，质量误差在要求范围内，因为肽质量误差以原点为中心轴，其范围小于10ppm(图1)。gydF4y2Ba3.gydF4y2Baa和c）。其次，样品制备达到标准，因为大多数肽长度分布在8至20个氨基酸残基之间（图。gydF4y2Ba3.gydF4y2BaB和D），符合毒素消化肽的法律。在我们的研究中，当蛋白质的LOG2倍变化超过1.5（上调）或小于0.667（下调）和a时，认为蛋白质被认为是差异表达的。gydF4y2BapgydF4y2Ba- 低于0.05。基于间作和单一栽培系统的比较，检测到285组差异表达的蛋白质gydF4y2BaE. Urophylla×E. GrandisgydF4y2Ba根系丰度下降的有154个(54.04%)组，增加的有131个(45.96%)组。为gydF4y2Bad . odoriferagydF4y2Ba根，我们鉴定了67组（29.39％）的下调和221组（70.61％）上调蛋白（表gydF4y2Ba1gydF4y2Ba，表gydF4y2BaS1gydF4y2Ba和gydF4y2BaS2gydF4y2Ba）.gydF4y2Ba

差异定量蛋白的功能富集gydF4y2Ba

我们的研究结果表明，差异表达蛋白的倍数变化在1.5倍以上，与生物合成、应激和防御反应、碳水化合物和能量代谢、核酸代谢、蛋白质代谢细胞运输、生物调控和信号转导有关。细胞壁和细胞骨架代谢、茉莉酸(JA)的生物合成等。间作与单作gydF4y2Ba桉树gydF4y2Ba，生物合成、核酸代谢和细胞运输蛋白上调，其他蛋白下调(图。gydF4y2Ba4gydF4y2Ba一种）。为gydF4y2Bad . odoriferagydF4y2Ba，除了具有用于间作与单一培养的生物合成中的功能之外，大多数蛋白质被降低了（图。gydF4y2Ba4gydF4y2Bab）。gydF4y2Ba

将蛋白质分配给不同类别后，它们的数量通过-log10计算（gydF4y2Bap值gydF4y2Ba） 方法。为gydF4y2BaE. Urophylla×E. GrandisgydF4y2Ba间作与单作相比，与谷氨酰胺连接酶活性相关的蛋白质含量差异为1.51，与生物刺激相关的蛋白质含量差异为10.79(图1)。gydF4y2Ba5gydF4y2Ba一种）。然而，对于gydF4y2Bad . odoriferagydF4y2Ba，包膜蛋白的蛋白含量为1.33，结构域特异性结合蛋白的蛋白含量为3.87。gydF4y2Ba5gydF4y2Bab）。gydF4y2Ba

差异表达蛋白的KEGG通路分析gydF4y2Ba

确定了四种途径gydF4y2BaE. Urophylla×E. GrandisgydF4y2Ba蛋白质，例如核糖体（13组蛋白质，gydF4y2BapgydF4y2Ba < 0.05), phenylpropanoid biosynthesis (9 groups of proteins), starch and sucrose metabolism (6 groups of proteins) and sesquiterpenoid and triterpenoid biosynthesis (2 groups of proteins) (Fig.6gydF4y2Ba一个和表格gydF4y2BaS3.gydF4y2Ba）.为gydF4y2Bad . odoriferagydF4y2Ba蛋白质，鉴定了六种途径，其中包括抗精素体（10组蛋白质），黄酮类生物合成（4组蛋白），糖磷脂哌啶生物合成 - 球蛋白和isoglobo系列（2组蛋白），泛素介导的蛋白水解（4组蛋白），脂肪酸降解（4组蛋白质）和内质网（8组蛋白）中的蛋白质加工（图。gydF4y2Ba6gydF4y2Bab和表gydF4y2BaS4gydF4y2Ba）.gydF4y2Ba

数量是通过-log10 (gydF4y2BapgydF4y2Ba-value)方法，类似于函数富集。间作与单作比较gydF4y2BaE. Urophylla.gydF4y2Ba×gydF4y2Ba大肠茅gydF4y2Ba，与蔗糖代谢，代谢，核糖体，三萜类化合物，B6代谢和天冬氨酸和谷氨酸代谢相关的丰富蛋白质显着增加。尽管如此，gydF4y2Bad . odoriferagydF4y2Ba显示出不同的结果，作为酸性降解，介导的蛋白水解，内质网的加工，聚合酶，生物合成 - 球蛋白和isoglobo系列，抗缩粒体和次级代谢途径被显着富集（图。gydF4y2Ba7gydF4y2Ba）.gydF4y2Ba

PRM的差异表达蛋白gydF4y2Ba

iTRAQ鉴定的差异表达蛋白经PRM验证。为了进行PRM分析，我们选择了4组与N代谢和生理代谢相关的蛋白质，这是两个物种共有的。如表所示gydF4y2Ba2gydF4y2Ba，两树种四组基因表达水平匹配良好。过氧化物酶的平均表达量和氮代谢水平均高于间作gydF4y2Ba桉树gydF4y2Ba与单作相比，间作的蛋白质含量均高于单作gydF4y2Bad . odorifera。gydF4y2BaT检验揭示了这两个不同条件下四个靶蛋白水平的一些差异，这与蛋白质水平定量的趋势完全一致，当ITRAQ量化时。gydF4y2Ba

为了检查来自ITRAQ和PRM分析的数据之间的相关性和准确性，我们比较了ITRAQ获得的蛋白质表达水平与通过PRM获得的数据之间的相关性。结果表明，对于ITRAQ和PRM数据，过氧化物酶和核糖体蛋白水平显着相关（R.gydF4y2Ba^2gydF4y2Ba> 0.75)，而N代谢和转运蛋白水平无显著相关(0.50≤R .gydF4y2Ba^2gydF4y2Ba < 0.75).

改善的营养利用是豆类/非豆科间作系统的主要优点之一gydF4y2Ba35gydF4y2Ba]，主要取决于根系获取外部资源以使植物在不同环境中生存和适应外部干扰的能力[gydF4y2Ba36gydF4y2Ba］．在本研究中，我们的结果表明，种间根际效应显著地提高了氮的吸收，促进了水稻的生长发育gydF4y2BaE. Urophylla.gydF4y2Ba×gydF4y2Ba大肠茅gydF4y2Ba，但效果gydF4y2Bad . odoriferagydF4y2Ba在间作系统中，根系分泌物的分泌量有限，可能与根系分泌物的分泌量有关gydF4y2Ba桉树gydF4y2Ba对...进行异教效果gydF4y2Bad . odoriferagydF4y2Ba［gydF4y2Ba37gydF4y2Ba］．另外，传输的n为键n资源提供了gydF4y2Ba桉树gydF4y2Ba通过增加植株生长和后续根系生长所需的养分储备，显著改善幼苗的生理性能[gydF4y2Ba38gydF4y2Ba］．然而，对根本生长的局限性gydF4y2Bad . odoriferagydF4y2Ba也可能是由于氮的转移和自身氮营养的减少[gydF4y2Ba3.gydF4y2Ba，gydF4y2Ba15gydF4y2Ba］．我们的业绩还强调，种植NFT可能是维持种植土壤的N生育能力的有吸引力的选择gydF4y2Ba桉树gydF4y2Ba［gydF4y2Ba4gydF4y2Ba，gydF4y2Ba39gydF4y2Ba］．除了土壤和根部n浓度[gydF4y2Ba3.gydF4y2Ba， N转移最可能是由植物根系的差异表达蛋白引起的。gydF4y2Ba

在我们的研究中，有285％和288次差异表达蛋白质，蛋白质在检测到大于1.5倍gydF4y2BaE. Urophylla.gydF4y2Ba×gydF4y2Ba大肠茅gydF4y2Ba和gydF4y2Bad . odoriferagydF4y2Ba分别在间作和单一栽培系统中（表gydF4y2Ba1gydF4y2Ba）.从差异表达的蛋白，鉴定的蛋白进一步分类的基础上推定的功能。间作中丰度较高的蛋白主要是抗逆性蛋白(26.7%)和代谢蛋白(16.0%)gydF4y2Ba桉树gydF4y2Ba(无花果。gydF4y2Ba4gydF4y2Baa），而大多数差异表达的蛋白质在间作中被上调（76.7％）gydF4y2Bad . odoriferagydF4y2Ba（桌子gydF4y2Ba1gydF4y2Ba)，特别是代谢蛋白，以43.4%的速率涉及上调蛋白(图。gydF4y2Ba4gydF4y2Bab).此外，在PMR分析的两株树共有的4组蛋白中，根蛋白下调组的比例下降，而蛋白上调组的比例上升(表2)gydF4y2Ba2gydF4y2Ba）.基因表达量和蛋白质丰度的差异是由翻译后修饰引起的。利用蛋白质组学鉴定代谢过程(如N代谢和氨基酸代谢)和合成过程中的关键蛋白，可以深入了解N转移的机制。gydF4y2Ba

积极的影响gydF4y2Ba桉树gydF4y2Ba可能从间作系统中的差异表达蛋白质产生gydF4y2Ba

根系的比较蛋白质组学经常用于研究植物中的生长，特别是生理应激反应机制[gydF4y2Ba40gydF4y2Ba］．以前的研究表明，单一栽培gydF4y2Ba桉树gydF4y2Ba在减少疾病和加强疾病抑制方面可能不如间作gydF4y2Ba桉树gydF4y2Ba［gydF4y2Ba35gydF4y2Ba，gydF4y2Ba41gydF4y2Ba］．我们的蛋白质组学研究表明，胁迫和防御相关蛋白的一些关键蛋白在单一培养中增加gydF4y2BaE. Urophylla.gydF4y2Ba×gydF4y2Ba大肠茅gydF4y2Ba来源于对氧化应激的反应，包括与生物刺激反应、防御反应、应激反应和刺激反应等相关的反应。gydF4y2Ba4gydF4y2Ba和gydF4y2Ba5gydF4y2Ba）.例如，间作作物的过氧化物酶水平较高gydF4y2BaE. Urophylla.gydF4y2Ba×gydF4y2Ba大肠茅gydF4y2Ba被检测到（A0A059AL91，表gydF4y2Ba2gydF4y2Ba），这不仅防止了活性损伤，而且还防止了生长素（可能的吲哚-3-乙酸-Amido合成酶GH3.1 IAA）和反应性氧（ROS）[gydF4y2Ba34gydF4y2Ba］．这些变化进一步促进了激素系统的再平衡，调控了不定根和侧根的形成，以适应环境胁迫[gydF4y2Ba42gydF4y2Ba］．但是，过氧化物酶4样（附加文件gydF4y2Ba2gydF4y2Ba：trinity_dn34591，表s2-no。55）和Nodulin-13样同种型X1（附加文件gydF4y2Ba2gydF4y2Ba：trinity_dn40711，表s2-no。112）在间作中下调gydF4y2Bad . odoriferagydF4y2Ba，这也可能表明对gydF4y2Bad . odoriferagydF4y2Ba在间作系统中。此外，酒精脱氢酶在单一培养中上调gydF4y2BaE. Urophylla.gydF4y2Ba×gydF4y2Ba大肠茅gydF4y2Ba当植物受到压力时(附加文件gydF4y2Ba1gydF4y2Ba表s1 -编号:A0A058ZYN2160)，然后，核碱-抗坏血酸转运体表达增加，以调控HgydF4y2Ba_2gydF4y2BaOgydF4y2Ba_2gydF4y2Ba提高植物抗逆性的物质[gydF4y2Ba43gydF4y2Ba］．gydF4y2Ba桉树gydF4y2Ba生长将受益于这些蛋白质的变化，因为引入NFTs。gydF4y2Ba

在gydF4y2BaE. Urophylla.gydF4y2Ba×gydF4y2Ba大肠茅gydF4y2Ba谷胱甘肽s -转移酶(GST)(附加文件gydF4y2Ba1gydF4y2Ba：A0A059AX10，表S1- No.49）和同源物谷胱甘肽S转移酶U25（附加文件gydF4y2Ba1gydF4y2Ba: A0A058ZUA9，表s1 -序号60)间作比单作增加;这些化合物在植物的细胞解毒和耐受性中起着关键作用[gydF4y2Ba33gydF4y2Ba]，通过增加酶的水平来增加毒素的清除[gydF4y2Ba44gydF4y2Ba］．此外，高含量的吉布林斯（附加文件gydF4y2Ba1gydF4y2Ba表s1 -编号:A0A059A3Y56)和硫氧还蛋白(附加文件gydF4y2Ba1gydF4y2Ba：A0A059BPT5，表S1-NO。99）在间作中被发现gydF4y2BaE. Urophylla.gydF4y2Ba×gydF4y2Ba大肠茅gydF4y2Ba根，可以改善植物疾病。因此，间作比单作具有优势gydF4y2Ba桉树gydF4y2Ba增长和提供gydF4y2Ba桉树gydF4y2Ba强应力阻力较强[gydF4y2Ba33gydF4y2Ba，gydF4y2Ba34gydF4y2Ba]通过蛋白质调节。尽管如此，对于间作Vs单一栽培gydF4y2Bad . odoriferagydF4y2Ba，赤霉素(附加文件gydF4y2Ba2gydF4y2Ba: TRINITY_DN35143，表S2-No。61)因抗逆性增强而下调。在此情况下，茉莉酸(jasmonic acid, JA)信号通路上调[gydF4y2Ba33gydF4y2Ba］．总的来说，我们认为gydF4y2Ba桉树gydF4y2Ba与单一栽培系统相比，间作系统的交互可以改善其生态适应，而优势gydF4y2Ba桉树gydF4y2Ba在这些相互作用中可能代表了N从gydF4y2Bad . odorifera。gydF4y2Ba

调节氮素之间的转移gydF4y2Ba桉树gydF4y2Ba和gydF4y2Bad . odoriferagydF4y2Ba从蛋白质组学的角度来看gydF4y2Ba

如前面的研究所示，豆科源性N转移到邻居gydF4y2Ba桉树gydF4y2Ba植物 [gydF4y2Ba3.gydF4y2Ba，gydF4y2Ba15gydF4y2Ba］．在我们的研究中，我们证明了N转移发生在gydF4y2Bad . odoriferagydF4y2Ba来gydF4y2BaE. Urophylla.gydF4y2Ba×gydF4y2Ba大肠茅gydF4y2Ba以14.61％的速度，其等于150.62 mg n的增强gydF4y2BaE. Urophylla.gydF4y2Ba×gydF4y2Ba大肠茅gydF4y2Ba(无花果。gydF4y2Ba2gydF4y2Ba）与差异蛋白质表达有关。与N复合转运有关的蛋白质，其在植物中促进植物的合成和运输，在间作的较高丰富gydF4y2BaE. Urophylla.gydF4y2Ba×gydF4y2Ba大肠茅gydF4y2Ba．我们认为，较高丰富的N次交通蛋白质是有益于N的合成和吸收gydF4y2BaE. Urophylla.gydF4y2Ba×gydF4y2Ba大肠茅gydF4y2Ba．重要的是，通过对间作与单作的KEGG途径分析，发现具有合成功能的蛋白质(11组)多于具有代谢功能的蛋白质(6组)gydF4y2BaE. Urophylla.gydF4y2Ba×gydF4y2Ba大肠茅gydF4y2Ba，而在gydF4y2Bad . odoriferagydF4y2Ba(代谢功能20组，合成功能6组)gydF4y2Ba6gydF4y2Ba和gydF4y2Ba7gydF4y2Ba，表gydF4y2BaS3.gydF4y2Ba和gydF4y2BaS4gydF4y2Ba）;这些可以代表n转移的键信号gydF4y2Bad . odoriferagydF4y2Ba来gydF4y2Ba桉树gydF4y2Ba．N从nft转移到伴生植物是通过活性根瘤直接排泄N化合物[gydF4y2Ba44gydF4y2Ba，gydF4y2Ba45gydF4y2Ba]或从枯死的植物部分分解而渗出的可溶氮化合物[gydF4y2Ba46gydF4y2Ba]，导致更多代谢途径gydF4y2Bad . odoriferagydF4y2Ba随着Intercropping VS单一栽培。因此，为了满足间作系统中N转移的条件，通过间作分泌更多的N化合物gydF4y2Bad . odoriferagydF4y2Ba代谢蛋白的数量较多，而合成可能发生在间作作物中gydF4y2Ba桉树gydF4y2Ba在吸收N化合物后gydF4y2Bad . odoriferagydF4y2Ba．gydF4y2Ba

除了这些直观的表征外，在我们的研究中，N转移与两个物种的N代谢和N同化蛋白的蛋白质组学有关。结果表明，通过根系互作，两种植物的n -代谢蛋白丰度发生了变化，其中谷氨酸脱氢酶(GDH)和谷氨酰胺合成酶根瘤同工酶(GS)蛋白水平较高(附文件)gydF4y2Ba1gydF4y2Ba表s1 -编号:A0A059BTT8118)gydF4y2BaE. Urophylla.gydF4y2Ba×gydF4y2Ba大肠茅gydF4y2Ba间作比单作(上调1.5倍)。当植物从土壤中吸收无机氮时，GS和GDH首先将其转化为有机氮。因此，GS可以通过反应的催化作用将植物体内所有的N导通，是N同化代谢途径中的关键酶[gydF4y2Ba47gydF4y2Ba，gydF4y2Ba48gydF4y2Ba］．先前的研究表明，植物中的GS改善了植物生长和生产率[gydF4y2Ba33gydF4y2Ba]由于N个代谢蛋白（例如GDH和GS）的丰度增加，通过根际效应[gydF4y2Ba34gydF4y2Ba］．根际效应促进了水稻氮素同化和生产力的提高gydF4y2BaE. Urophylla.gydF4y2Ba×gydF4y2Ba大肠茅gydF4y2Ba根，但限制了那些gydF4y2Bad . odoriferagydF4y2Ba．更重要的是，发现蔗糖合成酶（Susy）gydF4y2Bad . odoriferagydF4y2Ba根（附加文件gydF4y2Ba2gydF4y2Ba：trinity_dn40013，表s2-no。106）并在间作系统中下调。Gordon等人。（1999）表明蔗糖新陈代谢调节并控制NFT中的SAYS表达，以改变N固定效率[gydF4y2Ba49gydF4y2Ba］．我们以前的研究证实，N转移与N之间存在正相关性gydF4y2Ba_2gydF4y2Ba- NFTs中的固定[gydF4y2Ba3.gydF4y2Ba，gydF4y2Ba50gydF4y2Ba];因此，Susy的变化表明n转移发生在gydF4y2Bad . odoriferagydF4y2Ba和gydF4y2BaE. Urophylla.gydF4y2Ba×gydF4y2Ba大肠茅gydF4y2Ba．以上结果表明，GS、GDH和SuSy是间作系统氮素转移的关键信号。gydF4y2Ba

氨基酸代谢也是反映氮代谢和转运的关键因素gydF4y2BaE. Urophylla.gydF4y2Ba×gydF4y2Ba大肠茅gydF4y2Ba和gydF4y2Bad . odoriferagydF4y2Ba．n缺陷的根组织能够快速促进氨基酸的分解和通过氨基转移酶的新氨基酸的合成，其介导n新陈代谢水平[gydF4y2Ba51gydF4y2Ba］．肽- n4 -(n -乙酰- β -氨基葡萄糖基)天冬酰胺酰胺酶A(附加文件gydF4y2Ba1gydF4y2Ba表s1 -编号:A0A059A9F1205)和天冬氨酸蛋白酶AED3亚型X2(附加文件gydF4y2Ba1gydF4y2Ba：A0A059AD87，表S1-NO。195）与单一栽培相比，间作系统中的较低积累，指示N转移到gydF4y2Ba桉树gydF4y2Ba并减轻了间作系统的n缺陷。异柠檬酸脱氢酶（ITD）诱导异柠檬酸氧化脱羧，以产生-ketoglutaric酸，和NADPgydF4y2Ba^+gydF4y2Ba-ITD与GS/GAGOT循环相连，为铵同化提供碳骨架和NADPH。在这里，我们发现nadp依赖的苹果酶X1亚型较高gydF4y2BaE. Urophylla.gydF4y2Ba×gydF4y2Ba大肠茅gydF4y2Ba间作比单作根系变化小，但变化幅度小于1.5倍，说明碳骨架流向氮同化的方向增强。此外，我们还发现，间作和单作两种植物中转氨酶(催化氨基酸和酮酸之间的氨基酸转移)的表达水平高于单作。例如，丙氨酸乙醛酸转氨酶(附加文件gydF4y2Ba1gydF4y2Ba: A0A059A1E9，表s1 -编号d -氨基酸转氨酶(A0A059BMH2，表gydF4y2Ba2gydF4y2Ba和额外的文件gydF4y2Ba1gydF4y2Ba:表S1-No。131)gydF4y2BaE. Urophylla.gydF4y2Ba×gydF4y2Ba大肠茅gydF4y2Ba是调节;为gydF4y2Bad . odoriferagydF4y2Ba，推定支链氨基酸氨基转移酶7亚型X1 (TRINITY_DN45090)，乙酰氨基转移酶(附加文件gydF4y2Ba2gydF4y2Ba：trinity_dn44984，表s2-no。163）和色氨酸氨基转移酶相关蛋白4样（Trinity_DN39873，表gydF4y2Ba2gydF4y2Ba和额外的文件gydF4y2Ba2gydF4y2Ba：表S2-NO。105）上调。这些结果强调，N植物根部的同化增强，尤其是那些gydF4y2Ba桉树gydF4y2Ba，这解释了氮在两种作物间转移的间接指示。gydF4y2Ba

不同糖酵解途径和TCA周期对N转移的潜在影响gydF4y2Ba

以前的研究表明，N短缺也导致糖溶解中参与的蛋白质的丰富变化和TCA周期[gydF4y2Ba51gydF4y2Ba］．糖酵解途径将糖降解为丙酮酸[gydF4y2Ba52gydF4y2Ba[当线粒体丙酮酸载体减少时，线粒体内部的丙酮酸载体蛋白减少。丙酮酸激酶，用于将来自磷酸盐丙酮酸盐的高能磷酸盐转移到ADP并产生ATP的速率限制酶，在更高的水平gydF4y2Bad . odoriferagydF4y2Ba与间作的单一栽培的根源，可能是由于间作中的ngydF4y2Bad . odoriferagydF4y2Ba转移至gydF4y2BaE. Urophylla.gydF4y2Ba×gydF4y2Ba大肠茅gydF4y2Ba．此外，n缺乏的组织能够迅速将醋酸合成到某些脂肪酸中，特别是棕榈酸和油酸。这些化合物的降解产生乙酰辅酶a (AC)被称为生酮，因为这些物质可以用来合成脂肪酸或酮体[gydF4y2Ba51gydF4y2Ba］．糖酵解的增强将导致在TCA循环期间AC的积累，导致响应急性N缺乏的大量ATP [gydF4y2Ba53gydF4y2Ba］．在我们的研究中，AC(附加文件gydF4y2Ba2gydF4y2Ba：trinity_dn48754，表s2-no。238）在间作的高水平比单一栽培中发现gydF4y2Bad . odoriferagydF4y2Ba氮转移后的缺氮反应。TCA循环是能量循环的关键过程，也是营养物质的最终代谢途径，其中包括三种关键酶:柠檬酸合酶(CS)、ITD和酮戊二酸脱氢酶(KLDA) [gydF4y2Ba33gydF4y2Ba］．CS (A0A059AKY9、A0A059B6K2、A0A059BEH3、A0A059D8E5)仅存在于gydF4y2BaE. Urophylla.gydF4y2Ba×gydF4y2Ba大肠茅gydF4y2Ba根，但随着Intercropping VS单一栽培而变化小于1.5倍。ATP-柠檬酸合酶α链蛋白1（A0A059D8E5）在间作中增加gydF4y2BaE. Urophylla.gydF4y2Ba×gydF4y2Ba大肠茅gydF4y2Ba，促进了n转移gydF4y2Bad . odoriferagydF4y2Ba来gydF4y2Ba桉树gydF4y2Ba促进叶绿素合成。NADP依赖性苹果酵母催化氧化丙酸丙酮酸的氧化脱羧，参与糖酵解途径和TCA循环[gydF4y2Ba54gydF4y2Ba]，在间作中上调gydF4y2BaE. Urophylla.gydF4y2Ba×gydF4y2Ba大肠茅gydF4y2Ba(附加文件gydF4y2Ba1gydF4y2Ba: A0A059CL16，表s1 -编号80;S1-No A0A059CS67,表。72)，通过C和N代谢途径的协调调节而导致N代谢的变化[gydF4y2Ba55gydF4y2Ba］．这一现象很大程度上是由于N的转移增加了N的含量gydF4y2Bad . odoriferagydF4y2Ba来gydF4y2BaE. Urophylla.gydF4y2Ba×gydF4y2Ba大肠茅gydF4y2Ba．gydF4y2Ba

在TCA循环中，将柠檬酸转化为异柠檬酸的关键酶是附子水合酶，在糖酵解和糖异生过程中，烯醇化酶是催化2-磷酸- d -甘油酸可逆脱水为磷酸烯醇丙酮酸的关键酶[gydF4y2Ba33gydF4y2Ba];但两种酶在不同种间无显著差异gydF4y2BaggydF4y2Ba和单一治疗。然而，核糖体是结构不同的蛋白质，在翻译调控和N代谢中发挥重要作用[gydF4y2Ba56gydF4y2Ba，在间作中上调gydF4y2Bad . odoriferagydF4y2Ba（trinity_dn31489，表gydF4y2Ba2gydF4y2Ba）但在间作中下调gydF4y2Ba桉树gydF4y2Ba（a0a059br3，表gydF4y2Ba2gydF4y2Ba）由ITRAQ和PRM。该结果与KDGG途径的发现一致，即间作中的代谢函数强gydF4y2Bad . odoriferagydF4y2Ba提示转到gydF4y2Ba桉树gydF4y2Ba．gydF4y2Ba

目前的结果鼓励我们推荐gydF4y2BaE. Urophylla.gydF4y2Ba×gydF4y2Ba大肠茅gydF4y2Ba/gydF4y2Bad . odoriferagydF4y2Ba种植园。n转移发生gydF4y2Bad . odoriferagydF4y2Ba来gydF4y2BaE. Urophylla.gydF4y2Ba×gydF4y2Ba大肠茅gydF4y2Ba并建立了营养条款之间的有益循环和gydF4y2BaE. Urophylla.gydF4y2Ba×gydF4y2Ba大肠茅gydF4y2Ba根际效应不影响氮的吸收gydF4y2Bad . odoriferagydF4y2Ba．根际效应通过提高ATP合成酶、GS和GDH等蛋白质水平促进氮同化和氮转移。值得注意的是,gydF4y2BaE. Urophylla.gydF4y2Ba×gydF4y2Ba大肠茅gydF4y2Ba在N转移过程中是有益的，并且在合成途径中涉及的蛋白质更差异表达蛋白质比在代谢途径中，但观察到相反的结果gydF4y2Bad . odorifera。gydF4y2Ba发现两组复合转运蛋白gydF4y2BaE. Urophylla.gydF4y2Ba×gydF4y2Ba大肠茅gydF4y2Ba改善N同化和合成;即，N的分子机制转移gydF4y2Bad . odoriferagydF4y2Ba来gydF4y2BaE. Urophylla.gydF4y2Ba×gydF4y2Ba大肠茅gydF4y2Ba我们的研究中的蛋白质组学解释。然而，应提供对该系统中N转移可能效益的研究，以评估对生产率的长期影响。因此，需要更多的试验对这些环境条件，分析方法和现场实验评估需要核实这些调查结果和建议。gydF4y2Ba

实验网站和设计gydF4y2Ba

实验1gydF4y2Ba

试验于2017年5月18日在中国广西大学(108°17 ' 30.3″E, 22°51 ' 4.79″N)的温室内进行，气温为21°C至28°C。一个gydF4y2Bad . odoriferagydF4y2Ba植物与一个人进行了间作gydF4y2BaE. Urophylla×E. GrandisgydF4y2Ba每个锅（直径50厘米和45厘米）的植物，和gydF4y2Bad . odoriferagydF4y2Ba和gydF4y2BaE. Urophylla.gydF4y2Ba×gydF4y2Ba大肠茅gydF4y2Ba单一栽培代表了我们试验中的对照组，即两个gydF4y2Bad . odoriferagydF4y2Ba或两者gydF4y2BaE. Urophylla.gydF4y2Ba×gydF4y2Ba大肠茅gydF4y2Ba所有的植物材料在中国南方都很常见，我们在研究中遵循了机构、国家或国际指南。植物材料经南宁市八贵商业苗圃批准。先前种植的土壤gydF4y2BaPinus Massoniana.gydF4y2Ba在中国南宁梁凤江实验站采集。总氮kg为1.22 ggydF4y2Ba^{−1gydF4y2Ba}，0.57克总P千克gydF4y2Ba^{−1gydF4y2Ba}，11.85g k kggydF4y2Ba^{−1gydF4y2Ba}， pH值4.65。土壤干燥后，以珠光体比25:1与土壤混合，以保持土壤的透水性。gydF4y2Ba

为避免营养损失，塑料防漏托盘置于锅底。将植物浇水以在整个生长阶段的40-80％的水持能力下保持土壤水分。所有治疗均以完全随机设计应用，每次治疗都有三种重复。gydF4y2Ba

实验2 (gydF4y2Ba^15gydF4y2BaN标记)gydF4y2Ba

在本实验中，种植条件与中完全相同gydF4y2Ba实验1gydF4y2Ba．我们使用PVC圆柱体(80 * 120厘米)，在两端开封gydF4y2Bad . odoriferagydF4y2Ba树冠上，叶子被喷上了gydF4y2Ba^15gydF4y2BaYao等所描述的n标记尿素[gydF4y2Ba3.gydF4y2Ba］．0.75％（m / m）溶液gydF4y2Ba^15gydF4y2Ban标记尿素，10.32原子%gydF4y2Ba^15gydF4y2Ban用于标记表面的表面gydF4y2Bad . odoriferagydF4y2Ba树叶，然后，树叶立即被密封聚乙烯袋覆盖，直到第二天避免gydF4y2Ba^15gydF4y2Ban污染相关的gydF4y2BaE. Urophylla.gydF4y2Ba×gydF4y2Ba大肠茅gydF4y2Ba或土壤。土壤表面被两层塑料薄膜覆盖，用海绵上方预防gydF4y2Ba^15gydF4y2BaN污染的径流gydF4y2Ba^15gydF4y2Ba叶面喂养期间的N-标记的溶液。全部gydF4y2Ba^15gydF4y2Ba严格控制N标记过程，以确保没有gydF4y2Ba^15gydF4y2Ba土壤的氮污染或gydF4y2BaE. Urophylla.gydF4y2Ba×gydF4y2Ba大肠茅gydF4y2Ba叶子。gydF4y2Ba

根系确定和n分析gydF4y2Ba

6个月后，1克的根尖gydF4y2BaE. Urophylla×E. GrandisgydF4y2Ba和gydF4y2Bad . odoriferagydF4y2Ba于2017年12月采集，每个根用去离子水冲洗，并在N液中(−80°C)保存10分钟，以便进一步分析。在收获时，间作的植株被分开gydF4y2BaE. Urophylla×E. GrandisgydF4y2Ba和gydF4y2Bad . odoriferagydF4y2Ba．用手分离两种物种的根，仔细洗涤以除去土壤。通过EPSON根扫描仪扫描根长度和表面积，并用于通过Winrhizon Pro获得图像分析。然后，将收获的材料在60℃下干燥直至获得恒定的干重。将干燥的根材研磨在球磨机中并通过0.2mm筛网，通过使用连续流动化学分析仪（AA3，密封分析，Norderstedt，德国）测定总N含量。gydF4y2Ba

蛋白质分析gydF4y2Ba

蛋白质提取和制剂gydF4y2Ba

实验1的样品取于−80℃冰箱中，将适量的组织样品加入到液体N预冷砂浆中，将液体N样品充分研磨成粉末。采用Neilson等人和Guo等人开发的方法提取可溶性蛋白[gydF4y2Ba57gydF4y2Ba，gydF4y2Ba58gydF4y2Ba]:首先在400 mg冻干根粉中加入4体积的裂解缓冲液(10 mM二硫糖醇(DTT)、1%蛋白酶抑制剂鸡尾酒和2 mM EDTA)，然后在20000 g 4℃下漩涡离心10分钟。最后用20% TCA在4℃冷沉淀2 h, 4℃12,000 g离心10 min后弃上清。剩余沉淀用冷丙酮洗涤三次，加入8 M尿素重新溶解蛋白;然后根据厂家说明使用BCA试剂盒测定蛋白浓度。gydF4y2Ba

TMT / iTRAQ标签gydF4y2Ba

蛋白溶液用5 mM二硫苏糖醇在56°C下还原30分钟，用11 mM碘乙酰胺在黑暗和室温下烷基化15分钟。将蛋白样品在尿素中加入100 mM TEAB，浓度小于2 M。在此之后，第一次消化，以1:50的胰蛋白酶与蛋白质的质量比过夜，第二次消化，以1:100的胰蛋白酶与蛋白质的质量比4 h。经胰蛋白酶消化后，将多肽脱盐并真空干燥。最后，我们根据制造商的协议在0.5 M TEAB中重组样品，并使用TMT试剂盒/iTRAQ试剂盒进行处理[gydF4y2Ba59gydF4y2Ba，gydF4y2Ba60gydF4y2Ba］．gydF4y2Ba

LC-MS / MS分析gydF4y2Ba

将胰蛋白酶肽溶解在0.1％甲酸（溶剂A）中并通过Easy-NLC 1000 UPL1系统分离。液体A是含有0.1％甲酸和2％乙腈的水溶液。液体梯度设定如下：6-24％溶剂B，0-26分钟;24-33％26-34分钟;34-37分钟33-75％;37-40分钟75％;流速以恒定的700nl / min的恒定流速保持。gydF4y2Ba

多肽经过NSI源，然后在Q Exactive™Plus (Thermo)与超高效液相色谱耦合的串联质谱(MS/MS)。电喷雾电压为2.1 kV。在Orbitrap中以70000的分辨率检测到完整的肽段，m/z全扫描范围从350到1800。使用28个NCE设置对多肽进行MS/MS筛选，在Orbitrap中以17500的分辨率检测片段。采用数据依赖(data-dependent, DDA)采集数据，经一级扫描和二级质谱分析后，选择信号强度最高的前20个肽段的母离子依次进入HCD碰撞细胞裂解，裂解能量为28%。设置5E4为自动增益控制(AGC)，信号阈值为20000 ions/s，最大注入时间为100 ms。固定的第一质量设为100 m/z [gydF4y2Ba59gydF4y2Ba，gydF4y2Ba60gydF4y2Ba］．gydF4y2Ba

生物信息学分析gydF4y2Ba

当蛋白质具有超过1.50或小于0.67和a的蛋白质的LOG2折叠变化均为差异表达蛋白质差异表达蛋白质。gydF4y2BapgydF4y2Ba-值在间作与单作之间小于0.05。然后，通过搜索UniProt-GOA数据库(gydF4y2Bahttp://www.ebi.ac.uk/goa/gydF4y2Ba)[gydF4y2Ba61gydF4y2Ba］．蛋白质通过GO注释进行分类，使用双尾Fisher的确切试验来测试差异表达蛋白质对所有鉴定的蛋白质的富集;当纠正时，结果被认为是显着的gydF4y2BapgydF4y2Ba-Value小于0.05 [gydF4y2Ba61gydF4y2Ba］．基因和基因组（KEGG）在线服务工具KAAS的Kyoto百科全书被用于用Kegg数据库描述向蛋白质注释，并在Kegg Pathway数据库上映射注释结果。一个kegg途径gydF4y2BapgydF4y2Ba-value < 0.05被认为显著富集[gydF4y2Ba61gydF4y2Ba］．gydF4y2Ba

人口、难民和移民事务局分析gydF4y2Ba

如对于TMT分析所述，通过使用Easy-NLC 1000 UPLC系统，提取并用胰蛋白酶提取，减少和消化根样品的蛋白质。然而，电喷雾电压为2.0kV，全扫描范围为350至1100 m / z，与TMT分析不同。此外，横向扫描分辨率设定为17,500。为AGC设置了3E6，并将其设置为50毫秒。将二次质谱法的AGC设定为1E5，将其设定为120 ms，并且隔离窗口设定为1.6 m / z [gydF4y2Ba62gydF4y2Ba，gydF4y2Ba63gydF4y2Ba］．gydF4y2Ba

同位素分析：n转移计算和源自转移gydF4y2Ba

实验2中的所有材料(包括根、茎、叶)在65°C下干燥，用0.1 mm的筛子筛分，确定根、茎、叶gydF4y2Ba^15gydF4y2BaN浓度使用质谱仪(SN09072D, Homotopic, Thermo Fisher Scientific, Germany)。植物的价值gydF4y2Ba^15gydF4y2BaN原子过剩%由下式计算[gydF4y2Ba64gydF4y2Ba，gydF4y2Ba65gydF4y2Ba］．gydF4y2Ba

的gydF4y2Ba^15gydF4y2Ba计算供体叶片、茎、根的氮含量如下:gydF4y2Ba

总过剩gydF4y2Ba^15gydF4y2Ba通过对过量氮量的累加计算整株的氮含量gydF4y2Ba^15gydF4y2Ba根、茎和叶的氮含量。gydF4y2Ba

使用以下等式计算从供体衍生的接收器中的总N的比例gydF4y2Ba

其中％NT是从施主到接收器转移的总N的百分比。gydF4y2Ba

n（mg植物）的量gydF4y2Ba^{−1gydF4y2Ba}）从捐赠者转移计算如下：gydF4y2Ba

其中ngydF4y2Ba_{转移gydF4y2Ba}是单向净转账吗gydF4y2Bad . odoriferagydF4y2Ba来gydF4y2BaE. Urophylla.gydF4y2Ba×gydF4y2Ba大肠茅gydF4y2Ba．gydF4y2Ba

统计分析gydF4y2Ba

MS Excel和SPSS软件用于数据分析。通过对差异（ANOVA）和最低差异（LSD）多重比较来确定治疗之间差异的统计学意义。这些数字是从“电动”R包和Sigmaplot 13.0创建的。gydF4y2Ba

本研究中生成或分析的数据包括在本文中及其补充信息文件中。支持本研究结果的其他材料可从合理的请求上获得相应的作者获得。gydF4y2Ba

EDTA：gydF4y2Ba

乙二胺四乙酸gydF4y2Ba

BCA:gydF4y2Ba

Bicinchoninic酸gydF4y2Ba

相对标准偏差:gydF4y2Ba

相对标准偏差gydF4y2Ba

TMT：gydF4y2Ba

串联大规模标签gydF4y2Ba

SOD:gydF4y2Ba

超氧化物歧化酶gydF4y2Ba

PMR：gydF4y2Ba

平行反应监测gydF4y2Ba

质/女士:gydF4y2Ba

液相色谱 - 串联质谱法gydF4y2Ba

iTRAQ:gydF4y2Ba

具有相对和绝对定量的异交标签gydF4y2Ba

ADP：gydF4y2Ba

腺苷 - 二磷酸酯gydF4y2Ba

ATP：gydF4y2Ba

三磷酸腺苷gydF4y2Ba

TCA：gydF4y2Ba

三羧酸gydF4y2Ba

AC：gydF4y2Ba

乙酰CoAgydF4y2Ba

作者非常感谢美国的期刊专家（gydF4y2Bawww.aje.cn.gydF4y2Ba)和兰亚辉，感谢他们在编写本手稿时提供的语言帮助。gydF4y2Ba

本工作得到了中国国家自然科学基金（Grant No.31460196到Shaoming Ye的第31460196号）和广西研究生教育的创新项目（授予YCBZ2018012至仙玉瑶）。资金机构没有参与研究的设计，收集，分析和解释数据或写作稿件。gydF4y2Ba

隶属关系gydF4y2Ba

1. 广西大学林业学院，南宁，广西530004gydF4y2Ba

   咸宇瑶，凉腾廖，永镇黄，葛粉，梅阳＆少女gydF4y2Ba

2. 中国科学院南方植物园退化生态系统植被恢复与管理重点实验室，广州510650gydF4y2Ba

   咸宇瑶gydF4y2Ba

贡献gydF4y2Ba

SY、XY、MY设计实验;XY、LL、GF、YH进行实验;XY、LL、SY对实验结果和数据进行分析，开发分析工具;XY、SY、MY撰写手稿;所有作者阅读并批准了最终的手稿。gydF4y2Ba

相应的作者gydF4y2Ba

对应到gydF4y2BaShaoming你们gydF4y2Ba．gydF4y2Ba

伦理批准和同意参与gydF4y2Ba

不适用。gydF4y2Ba

同意出版物gydF4y2Ba

不适用。gydF4y2Ba

相互竞争的利益gydF4y2Ba

没有任何作者有任何相互竞争的兴趣。gydF4y2Ba

出版商的注意事项gydF4y2Ba

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