跳到主要内容GydF4y2Ba
下载PDF.GydF4y2Ba

来自花椰菜的血浆膜囊泡和它们在水段中的作用GydF4y2Ba

BMC植物生物学GydF4y2Ba体积GydF4y2Ba21GydF4y2Ba， 文章编号：GydF4y2Ba30.GydF4y2Ba（GydF4y2Ba2021GydF4y2Ba）GydF4y2Ba引用这篇文章GydF4y2Ba

抽象的GydF4y2Ba

背景GydF4y2Ba

菜花 （GydF4y2Ba芸苔属植物oleraceaGydF4y2BaL. var。GydF4y2BaBotrytis.GydF4y2Ba）花序主要由共同组织组成，具有高细胞增殖。这种相当大的细胞密度使开花具有大部分膜的器官。然而，关于该器官中存在的脂质和蛋白质组成的脂质和蛋白质组成的具体作用很少。GydF4y2Ba

结果GydF4y2Ba

本研究分析了花椰菜花序发育两个不同阶段质膜中脂质和蛋白质的含量，并与叶片质膜进行了比较。为此目的，对每个样品进行离心获得质膜囊泡，囊泡直径和渗透性(GydF4y2BaPF.GydF4y2Ba通过动态光散射分析GydF4y2Ba停止流动GydF4y2Ba技术分别。此外，通过气相色谱和HPLC分析脂肪酸和甾甾醇。通过HPLC-ESI-QTOF-MS的蛋白质组成特征，并将获得的数据与GydF4y2BaBrassicaceae.GydF4y2Ba在Uniprot数据库中存在的蛋白质有关通过Western印迹分析确定的水蛋白的存在。最高GydF4y2BaPF.GydF4y2Ba价值在90天花序衍生的质膜囊泡中发现（61.4±4.14μmsGydF4y2Ba−1GydF4y2Ba）.对于甾醇和脂肪酸，浓度根据原产的器官而变化。蛋白质简带揭示了来自PIP1和PIP2亚壳中的水素在花序和叶子中存在的存在。GydF4y2Ba

结论GydF4y2Ba

本研究表明，甾醇的组成，脂肪酸的不饱和度和存在于膜中的蛋白质分析给予它们的水通道功能。这代表了该字段中可用的有限信息的重要补充。GydF4y2Ba

背景GydF4y2Ba

如今，来自的作物GydF4y2BaBrassicaceae.GydF4y2Ba家庭是全球培养的家庭。其中，花椰菜（GydF4y2Ba芸苔属植物oleraceaGydF4y2BaL. var。GydF4y2BaBotrytis.GydF4y2Ba）脱颖而出其高生产和经济相关性。例如，2018年西兰花（Farccoli）生产约2600万吨（GydF4y2Bahttp://faostat.fao.org/GydF4y2Ba）.其巨大需求的主要原因是存在不同的健康促进生物术语 - 例如硫代葡萄糖素，多酚或维生素C - 为其可食用部分增加了良好的营养价值[GydF4y2Ba1GydF4y2Ba]．GydF4y2Ba

然而，有关植物植物花序分子结构的植物化学的近期信息可用。Smyth [GydF4y2Ba2GydF4y2Ba描述了花序是如何随着次级分生组织的形成而开始发育的。随后，分生组织持续增殖，形成高度分枝紧凑的白色螺旋状图案[GydF4y2Ba2GydF4y2Ba]．随后，未成熟的花序开始成熟，最终达到完全的花分化[GydF4y2Ba3.GydF4y2Ba]．虽然基因的干预与花卉公司的身份相关，但如GydF4y2BaTFL1、LFY AP1GydF4y2Ba,或GydF4y2BacalGydF4y2Ba，已被研究[GydF4y2Ba4.GydF4y2Ba[需要进一步理解这种过程的生物化学机制。此外，Grevsen等人。[GydF4y2Ba5.GydF4y2Ba]观察到环境因素，主要是温度，影响花序的产生。GydF4y2Ba

由于研究迄今为止的主要重点是开发的遗传控制，关于其中存在的膜的脂质和蛋白质组成毫无疑问。然而，花椰菜的可食用部分存在高细胞增殖，其具有高膜浓度[GydF4y2Ba6.GydF4y2Ba]．生物膜与细胞功能相关，不仅可以用于分区化的作用，而且还通过它们为各种类型的蛋白质（例如跨膜蛋白）创造适当环境的能力。后者主要确定细胞中存在的每种类型的膜的特定功能，并控制各种组成型功能，例如内吞作用和离子和水运输[GydF4y2Ba7.GydF4y2Ba]．GydF4y2Ba

在重要的跨膜蛋白中，水通道蛋白是主要的角色之一，因为它们负责水通过生物膜的运输[GydF4y2Ba8.GydF4y2Ba]．在花椰菜的共同组织细胞中，已经观察到存在嵌入真空膜中的高丰度水蛋白，其允许生长细胞溶胀，同时保持细胞磨鼠[GydF4y2Ba9.GydF4y2Ba]．然而，这些蛋白质的功能可以受到它们嵌入的膜的脂质的影响[GydF4y2Ba10GydF4y2Ba那GydF4y2Ba11GydF4y2Ba]．这表明膜的脂质组成不仅决定了膜的物理特性，而且还决定了膜中蛋白质的活性和功能[GydF4y2Ba12GydF4y2Ba]．脂质膜的主要成分是甾醇。这些分子与不同的功能相关，例如脂质包装，因为它们能够与膜蛋白和脂肪酸相互作用[GydF4y2Ba13GydF4y2Ba]．此外，已记录膜甾醇以调节膜水渗透性[GydF4y2Ba14GydF4y2Ba]．例如，据报道，双层中胆固醇的存在使其不易渗透到水[GydF4y2Ba15GydF4y2Ba]．另一方面，细胞膜中脂肪酸的组成由于其不饱和程度，也对细胞膜的厚度、稳定性和渗透性有一定的贡献[GydF4y2Ba16GydF4y2Ba]．GydF4y2Ba

因此，脂质和蛋白质组合物都是膜运输活性的决定因素，给药每种类型的膜特异性功能特征。出于上述原因，并且目的在于确定花椰菜共源性组织的血浆膜的特定功能，在这项工作中，在两种不同的花序发育阶段分析了脂肪酸，甾醇，水吡啶蛋白和其他蛋白质的存在。为了允许与营养组织进行比较，还分析了叶浆膜。GydF4y2Ba

方法GydF4y2Ba

植物材料GydF4y2Ba

五十商业花椰菜（GydF4y2Ba芸苔属植物oleraceaGydF4y2BaL. var。GydF4y2BaBotrytis.GydF4y2Ba）来自惠顿种子（Cau02417的种子，由Sakata Seed Iberica S.u.，valencia，西班牙）通过利用水和连续通气来发芽24小时。然后，将种子移植到蛭石中，并在黑暗中保持在28℃和60％相对湿度下2天。将幼苗（5天）转移到实验农场的农业土壤（37°47'52.7“N，0°52'00.7”W，15米ASL，穆尔西亚，西班牙）按照当地的立法进行培养．该实验从12月到2月进行，平均温度和17°C和60％（日）和4°C和65％（夜晚）的相对湿度在半干旱地中海气候下。使用数据转换器（AFORA S.A.，Barloworld Scientific，Murcia，Spain）记录每日平均温度和相对湿度。所有植物均用¼强度的Hoagland营养溶液滴灌。移植后70和90天收获它们。中间叶片和花序（各自的15个）在随机上进行采样，并在三种技术复制中称重新鲜。之后，将样品在4℃下保持1天直至加工。在濒危野生动物群和植物群（CITES）的濒危物种（CITES）的国际贸易公约[GydF4y2Ba17GydF4y2Ba]．GydF4y2Ba

血浆膜萃取GydF4y2Ba

如Casado-Vela等人所述进行血浆膜分离。[GydF4y2Ba18GydF4y2Ba]．将新鲜材料（100g）的样品在小块中切片并用1：1.6（w / v）萃取缓冲液的1：1.6（w / v）比例（0.5 m蔗糖，1mm dtt，50 mm Hepes，1.30mm抗坏血酸，pH 7.5）和0.5g PVP（聚乙烯吡咯烷酮）。10分钟后，均化样品并通过孔径为100μm的尼龙网过滤。然后，将滤液以10000×离心GydF4y2BaGGydF4y2Ba待30分钟，在4°C;收集上清液，50000×离心35 minGydF4y2BaGGydF4y2Ba，4°C。将获得的颗粒重悬于500μl含有5mM PBS和0.5M蔗糖（pH6.5）（Fab）的缓冲液中的缓冲液中。进行每种样品类型的三种不同的提取物。在由PEG-3350 /葡聚糖-T500-6.3％（W / W），5mM KCl，330mM蔗糖，2.5mM NAF和5mm K组成的两相系统中，将该微粒体馏分的两种毫升引入了这一微粒体级分。GydF4y2Ba3.GydF4y2Ba宝GydF4y2Ba4.GydF4y2Ba（pH 7.8）。该系统以4000离心5分钟GydF4y2Ba×gGydF4y2Ba．然后，收集上相并用含有9mM KCl，0.2M EgTA，0.5mM NAF和10mM Tris-硼酸酯（pH8.3）的缓冲液洗涤。然后，在55000处离心GydF4y2Ba×gGydF4y2Ba35分钟，在4℃下进行。将获得的颗粒重新悬浮在Fab中。使用RC DC蛋白质测定试剂盒（Biorad，California，USA）测定最终蛋白质浓度，牛血清白蛋白作为标准。如Casado-Vela等人所述估计PM的纯度。[GydF4y2Ba18GydF4y2Ba)(表GydF4y2Ba1GydF4y2Ba）.GydF4y2Ba

囊泡尺寸GydF4y2Ba

根据Barrajón-Catalán等人的描述，使用Malvern ZetaSizer Nano XL (Malvern Instruments Ltd.， Orsay, France)，通过动态光散射测定从不同样品中获得的囊泡的平均大小。[GydF4y2Ba19GydF4y2Ba]．该仪器允许分析直径从1 nm到3 μm的颗粒。GydF4y2Ba

停止流动光散射GydF4y2Ba

这些测量在20°C的发球率（施用的光药，皮头，英国）分光光度计中进行，如Maurel所描述的[GydF4y2Ba8.GydF4y2Ba]．通过90°和λ的动态光散射监测每个囊泡体积调节的动力学。GydF4y2Ba前任GydF4y2Ba515纳米。将来自每个样品型的纯化的血浆膜囊泡在30mM KCl和20mM Tris-MES的缓冲液中进行100倍稀释（pH8.3，最终渗透压360 mosmol kgGydF4y2Ba−1GydF4y2BaHGydF4y2Ba2GydF4y2Bao）。为了测量，将稀释的囊泡制剂与补充有540mm蔗糖的相同缓冲液（630 mosmol kg，将稀释的囊泡制剂混合在1：1比例（V：V）中混合GydF4y2Ba−1GydF4y2BaHGydF4y2Ba2GydF4y2Bao）。以这种方式，渗透梯度为270 mosmol kgGydF4y2Ba−1GydF4y2BaHGydF4y2Ba2GydF4y2Ba生成O。渗透性(GydF4y2BaPF.GydF4y2Ba）使用该公式计算：GydF4y2Ba

$$ pf = \ frac {k_ {exp} \ {v} _0} {a_v \ {v} _w \ {c} _ {out}} $$GydF4y2Ba

KGydF4y2Baexp.GydF4y2Ba是调整后的指数速度常数，vGydF4y2Ba0.GydF4y2Ba是平均的囊泡体积，aGydF4y2BaV.GydF4y2Ba水泡的平均表面积是V吗GydF4y2BaW.GydF4y2Ba是水摩尔质量和cGydF4y2Ba出GydF4y2Ba是外渗透压。GydF4y2Ba

脂质和甾醇分析GydF4y2Ba

将五百微升血浆膜与氯仿 - 甲醇（1：2）混合物混合[GydF4y2Ba20.GydF4y2Ba]．作为进一步甾醇分析的内标，β-粥（20μL，0.1mg mL）GydF4y2Ba−1GydF4y2Ba） 加入。然后，在10000的离心前将0.25ml氯仿加入混合物中GydF4y2Ba×gGydF4y2Ba6分钟。收集与蛋白质含量相对应的所得相互相对，以进行进一步的蛋白质组学分析。将氯仿相移入另一个管并用n蒸发GydF4y2Ba2GydF4y2Ba．对于甾醇分析，用n干燥50μl样品的氯仿相样品GydF4y2Ba2GydF4y2Ba然后使用吡啶（50μl）和AC乙酰化GydF4y2Ba2GydF4y2BaO(100μl)。2 h后，用N蒸发溶剂GydF4y2Ba2GydF4y2Ba加入20 μl乙酸乙酯。采用HP5毛细管柱(30 m × 0.25 mm × 0.25 μm)气相色谱法测定甾醇和脂肪酸含量。这是耦合到火焰离子化检测器(FID)。以氦为流动相(1ml min)GydF4y2Ba−1GydF4y2Ba）和热梯度施加：从150-195℃，每分钟的3℃增加3℃，每分钟的2℃至220℃，每分钟的6°C为220至300℃。GydF4y2Ba

蛋白质组学分析GydF4y2Ba

按照斯特森等人的方法处理样品。[GydF4y2Ba21GydF4y2Ba]．从500 μl的质膜囊泡中分离得到的质膜蛋白与100 μl的50 mM碳酸氢铵(pH 8.3)与0.01%蛋白酶Max (Promega, Madison, USA)混合。然后，在56℃下加入100 μl 20 mM DTT还原20 min。100 μl 100 mM IAA室温避光孵育30 min，进行烷基化反应。用1 μg胰蛋白酶(1:100 w/w)在37℃下孵育3 h进行消化。样品在快速真空浓缩器中干燥。干燥样品用20 μl水/乙腈/甲酸重悬(94.9:5:0.1)。采用Agilent Advance Bio Peptide Mapping高效液相色谱柱(2.7 μm × 100 mm × 2.1 mm, Agilent technologies)，温度控制在55℃，流速0.4 ml/min。使用水/乙腈/甲酸(10:89.9:0.1)的混合物作为洗脱液。检测使用安捷伦6550 Q-TOF偶联双电喷雾(AJS-Dual ESI)。 The experimental parameters were set in MassHunter Workstation Data Acquisition software (Agilent Technologies, Santa Clara, CA, USA), as described in Martínez-Ballesta et al. [22GydF4y2Ba]．数据使用Spectrum Mill MS蛋白质组学工作台(Agilent Technologies)进行处理。GydF4y2Ba

将获得的数据与Uniprot数据库中可用的信息进行比较（GydF4y2Bawww.uniprot.org.GydF4y2Ba） 为了GydF4y2BaBrassicaceae.GydF4y2Ba家庭。从基因本体数据库中确定蛋白质功能和位置[GydF4y2Ba23GydF4y2Ba]．GydF4y2Ba

凝胶电泳和免疫印迹GydF4y2Ba

采用从花椰菜叶子和花序中分离的血浆膜。为12％十二烷基硫酸钠 - 聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）负荷10微克蛋白质，如Myies等人所示。[GydF4y2Ba24GydF4y2Ba]．然后，将蛋白质转移到PVDF膜中，并在电泳转移细胞（Trans-Blot Sd Cell，Biorad，Ca，USA）中以15V在15V下保持20分钟，使用补充有0.05％SDS的牵引转移缓冲液[GydF4y2Ba24GydF4y2Ba]．在室温下将阻断溶液（将含有2％（w / v）脱脂干乳的Tbs）施加1小时。之后，将膜再次在室温下孵育1小时，含有0.05％吐温20和其中一种选定抗体的TBS。针对前45个N-末端残基提出的抗体GydF4y2Ba拟南芥蒂利亚纳GydF4y2BaPIP1;1(稀释1:3000，由Dr. Anthony Schäffner教授提供)和另一个针对PIP2 c端肽的17个残基GydF4y2BaA. Thaliana.GydF4y2Ba(稀释1:20000，由Veronique Santoni博士提供)。在4°C下进行过夜的孵化。与辣根过氧化物酶偶联的山羊抗兔IgG作为二抗(稀释1:20000)。用West-Pico Super signal substrate (Pierce, Rockford, IL, USA)开发了一种化学发光信号。定量使用ImageJ软件并进行密度分析。GydF4y2Ba

数据分析GydF4y2Ba

统计分析包括单因素方差分析，然后使用RStudio(版本3.4.4)进行Tukey HSD后期测试。GydF4y2Ba

结果GydF4y2Ba

质膜泡的平均大小GydF4y2Ba

图2中表示的平均囊泡尺寸（Nm）的结果。GydF4y2Ba1GydF4y2Ba，显示花序和叶片之间以及成熟阶段之间的显着差异（GydF4y2BaP 0.05）。叶片衍生的血浆膜囊泡的平均囊泡尺寸大于花序衍生的叶片（GydF4y2BaP.GydF4y2Ba< 0.05)。多分散性数据（图。GydF4y2Ba2GydF4y2Ba)表明，由花序衍生的质膜泡的大小变异性高于叶衍生的质膜泡(GydF4y2BaP 0.05）。因此，从叶子获得的囊泡的尺寸更均匀。GydF4y2Ba

图1GydF4y2Ba
图1GydF4y2Ba

从70-和90天花椰菜花序和叶子获得的血浆膜囊泡的比较尺寸（NM）。数据表示为手段（GydF4y2BaNGydF4y2Ba= 3,GydF4y2BaNGydF4y2Ba = different plasma membrane extractions) ± SE. Different letters show statistically significant differences (P.GydF4y2Ba< 0.05)GydF4y2Ba

全尺寸图像GydF4y2Ba
图2GydF4y2Ba
figure2GydF4y2Ba

从70-和90天的花椰菜花粉和叶子获得的血浆膜囊泡的多分散曲线。曲线是平均值（GydF4y2BaNGydF4y2Ba= 3,GydF4y2BaNGydF4y2Ba = different plasma membrane extractions). X axis is represented in logarithmic scale

全尺寸图像GydF4y2Ba

渗透水渗透率GydF4y2Ba

数字GydF4y2Ba3.GydF4y2Ba表明渗透水渗透率（GydF4y2BaPf,GydF4y2BaμmsGydF4y2Ba−1GydF4y2Ba）血浆膜囊泡在花序的两个成熟阶段之间显着不同（GydF4y2BaP.GydF4y2Ba< 0.05)那those derived from 90-day inflorescences having the highestPF.GydF4y2Ba（64.4±4.14μmsGydF4y2Ba−1GydF4y2Ba）.叶片的值较低，在两个成熟期之间没有显著差异(GydF4y2BaP.GydF4y2Ba > 0.05).

图3GydF4y2Ba
图3GydF4y2Ba

渗透水渗透率（GydF4y2BaPF.GydF4y2Ba，μmsGydF4y2Ba−1GydF4y2Ba）从70天和90天的花椰菜花序和叶子获得的血浆膜囊泡。数据是手段（GydF4y2BaNGydF4y2Ba= 3,GydF4y2BaNGydF4y2Ba = different plasma membrane extractions) ± SE. Different letters indicate statistically significant differences (P.GydF4y2Ba < 0.05, Tukey’s test) between treatments

全尺寸图像GydF4y2Ba

脂质分析GydF4y2Ba

脂肪酸GydF4y2Ba

脂肪酸的结果（总脂肪酸的百分比）分析显示在表中GydF4y2Ba1GydF4y2Ba．棕榈酸（C16：1）的百分比在70天至90天内没有变化，适用于花序衍生的血浆膜囊泡（GydF4y2BaP.GydF4y2Ba > 0.05). Furthermore, a similar percentage of palmitoleic acid was found in vesicles derived from 90-day leaves (P.GydF4y2Ba > 0.05), but a significant decrease was observed for vesicles from 70-day leaves (~ 29–31% vs ~ 19%). For oleic acid (C18:1), similar percentages were found in vesicles derived from inflorescences at the two maturation stages (P.GydF4y2Ba > 0.05). Surprisingly, the presence of oleic acid in leaves-derived vesicles greatly differed, the percentage in 70-day leaves being double that in inflorescences and almost 14-times higher when compared to 90-day leaves (P.GydF4y2Ba< 0.05)。对于亚油酸(C18:2)，在第70天和第90天，由花序衍生的质膜泡(GydF4y2BaP.GydF4y2Ba< 0.05)。然而，在叶片衍生的囊泡中观察到相反，亚油酸的含量在90天时增加（GydF4y2BaP.GydF4y2Ba< 0.05)。四种样品中的亚麻酸（C18：3）百分比显着差异（GydF4y2BaP.GydF4y2Ba< 0.05)。在叶片中发现了更高的比例，70天叶中的囊泡具有最高百分比（〜48％，〜44％的90天叶子）。对于花序衍生的囊泡，亚麻酸的比例在90天的样品中比在70天拍摄的那些（GydF4y2BaP.GydF4y2Ba< 0.05， ~ 40% vs ~ 35%)。GydF4y2Ba

表1脂肪酸百分比，单不饱和脂肪酸（MUFA）双键指数（DBI =σ（不饱和脂肪酸X双键）），不饱和脂肪酸的比例（RUFA =（C18：2 + C18：3）的比例/（C18：1），用于来自花椰菜花粉的血浆膜，在70天和90天的发育中留下。数据表示为手段（GydF4y2BaNGydF4y2Ba= 3,N = different plasma membrane extractions) ± SE. Different letters indicate statistically significant differences (P.GydF4y2Ba< 0.05，在HSD Tukey试验中)GydF4y2Ba
全尺寸表GydF4y2Ba

还测定了单不饱和脂肪酸（MUFA）的总百分比和不饱和脂肪酸（RUFA）的比例（表GydF4y2Ba1GydF4y2Ba）.花序衍生的样品的MUFA百分比显着高（GydF4y2BaP 0.05)。关于RUFA, 90天叶源质膜(GydF4y2BaP.GydF4y2Ba< 0.05)。同样，统计上显着增加（GydF4y2BaP.GydF4y2Ba双键指数(DBI)在花椰菜源性花序囊泡70 ~ 90天时< 0.05。此外，DBI显著较高(GydF4y2BaP.GydF4y2Ba< 0.05)in samples from 70-day leaves than in those from 90-day leaves.

甾醇内容GydF4y2Ba

甾醇含量(μg mgGydF4y2Ba−1GydF4y2Ba还评估了血浆膜囊泡的蛋白质（表GydF4y2Ba2GydF4y2Ba）.从统计上看，从90天的花序中提取的小泡中的油菜甾醇浓度显著增加，是70天花序中提取的小泡的3倍(GydF4y2BaP.GydF4y2Ba< 0.05)。从70天和90天的叶子中提取的小泡之间没有发现胆固醇浓度的差异(GydF4y2BaP.GydF4y2Ba > 0.05). For stigmasterol, no statistically significant differences were found between vesicles from inflorescences at the two maturation stages (P.GydF4y2Ba > 0.05). However, in leaves-derived vesicles, the concentration of stigmasterol was higher for 90-day leaves (0.16 ± 0.07 vs 0.25 ± 0.09 μg mg−1GydF4y2Ba的蛋白质,GydF4y2BaP.GydF4y2Ba< 0.05)。与70天的花序相比，在90天的花序中的囊泡中发现了2倍，统计学上显着增加，从90天的花序相比（GydF4y2BaP.GydF4y2Ba< 0.05)。70天叶和90天叶的小泡含量也有相似的差异(0.95±0.11 vs 2.14±0.37 μg mg .GydF4y2Ba−1GydF4y2Ba的蛋白质,GydF4y2BaP.GydF4y2Ba< 0.05)。豆甾醇/β-谷甾醇比值也进行了分析。70天花序的泡囊比最高，是90天花序的2倍，70天和90天叶的5倍(GydF4y2BaP.GydF4y2Ba< 0.05)。在70天和90天的叶片之间未发现稳定性上显着的差异（0.17±0.02 Vs 0.12±0.03μg/ mg蛋白质）GydF4y2BaP.GydF4y2Ba > 0.05).

表2甾醇含量（μgmgGydF4y2Ba−1GydF4y2Ba蛋白质膜从花椰菜花粉中的血浆膜，叶片在70天和90天植物发育中。数据表示为手段（GydF4y2BaNGydF4y2Ba= 3,GydF4y2BaNGydF4y2Ba = different plasma membrane extractions) ± SE. Different letters indicate statistically significant differences (P.GydF4y2Ba< 0.05, HSD Tukey试验)GydF4y2Ba
全尺寸表GydF4y2Ba

蛋白质组学分析和免疫印迹GydF4y2Ba

用分离的血浆膜囊泡的样品进行蛋白质组学分析，形成花序和叶子，以便定性地评估存在于获得的囊泡中的蛋白质进行进一步分析。如图1所示GydF4y2Ba1GydF4y2Ba，得到的蛋白质根据其可溶性，膜和未分类的细胞特征组织。在研究的所有样品（在两种成熟阶段的花序和叶片上），鉴定的可溶性蛋白质数量越高（40-48％），比膜蛋白的数量（40-44％）。此外，在叶片中鉴定出高百分比的未分类蛋白质（分别为90-D和70-D，分别为90-D和70-D中的90-D和70％）。在花序中测定的膜蛋白的数量非常相似（42％）（90-d和70-d），而在叶片中测定的这些蛋白质的数量高于70-d（44％），而不是90-D（40％）。GydF4y2Ba

在血浆膜蛋白内，它们也被其分子功能分类（图。GydF4y2Ba4.GydF4y2Ba）.它们分为七种功能簇（催化，结构分子活性，信号传导受体活性，结合，蛋白质折叠，转运蛋白活性和抗氧化活性）。所有样品显示出类似的蛋白质分布，是催化（35-44％）和突出为主要基团的结合蛋白（36-39％），其次是转运蛋白（11-18％）。在花序（11％）中，转运蛋白的数量低于叶片（18-19％）。结构蛋白质高于叶片（0.5％）的花序（6-7％）。鉴定的其余蛋白质在所有样品中非常低，仅在90-D叶中出现信号传导受体蛋白。GydF4y2Ba

图4GydF4y2Ba
图4.GydF4y2Ba

花椰菜中鉴定的血浆膜蛋白的功能分类。鉴定的蛋白质是基于基于基因本体数据库中描述的七种类别的分类[GydF4y2Ba23GydF4y2Ba]．GydF4y2Ba一种GydF4y2Ba70天的花序，GydF4y2BaB.GydF4y2Ba90天的花序，GydF4y2BaCGydF4y2Ba70天的叶子,GydF4y2BaD.GydF4y2Ba90天的叶子。图设计设计已经使用原产地（Pro），版本2019.Iniginallab Corporation，Northampton，MA，美国GydF4y2Ba

全尺寸图像GydF4y2Ba

还进行了一种搜索，其专注于衍生自花椰菜花粉和叶子的血浆膜中存在的水素。在所有样品类型中发现了与水通道蛋白相关的肽（表GydF4y2Ba3.GydF4y2Ba）.在花序和叶片中，鉴定了对应于宽群PIP1水素亚属（PIP1; 1，PIP1; 2，PIP1; 3，PIP1; 4）的肽。然而，只有在花序样本中的肽是与pip2亚家族检测到的pip2; 5和pip2; 7。特别强调可以放在pip2上; 7，检测到三种不同的肽片段，而只有一个肽测定的pip2; 5。在两种类型的样品中也鉴定了调色剂内在蛋白（尖端）亚家族的成员，尽管这组水蛋白通常靶向真空膜。特别是尖端1; 2和Tip2; 1在70天的花序和90天的叶子中被发现，而只有尖端; 2个肽在90天的花序和70天的叶子样本中检测到2个肽（表GydF4y2Ba3.GydF4y2Ba）.GydF4y2Ba

表3花椰菜花序和叶片质膜样品中鉴定的水通道蛋白。所有蛋白序列均从GydF4y2Ba芸苔属植物oleraceaGydF4y2BaL. var。GydF4y2Baoleracea.GydF4y2BaNCBI和UniProt数据库(ID)中的信息。这些符号GydF4y2Ba“+”GydF4y2Ba和GydF4y2Ba' - 'GydF4y2Ba分别表明样品中蛋白质的存在或不存在GydF4y2Ba
全尺寸表GydF4y2Ba

从叶片和花序中从血浆膜蛋白的SDS-PAGE分析获得的结果如图2所示。GydF4y2Ba5.GydF4y2Ba．检测到两个带的存在;60 kDa的上部带，对应于二聚体（d）的点形式，以及Ca的下带。30kDa，对应于单体形式（m）。分析了两个PIPS组，PIP1和PIP2。对于PIP1，70天和90天花序（23.4和15.7％D + M）的样本的带少于70天和90天叶片衍生的血浆膜蛋白（31和28.9％D + M). For PIP2 aquaporins, much denser bands were found for 70-day (27.7% D + M) and 90-day inflorescences (61.4% D + M) when compared with 70-day and 90-day leaves-derived samples (5.2 and 5.7% D + M).

图5GydF4y2Ba
图5.GydF4y2Ba

PIP1和PIP2 AUPAPLINS在花椰菜膜囊泡中存在的免疫印迹分析。GydF4y2Ba一种GydF4y2Ba70天花序的血浆膜，GydF4y2BaB.GydF4y2Ba来自90天的花序的血浆膜，GydF4y2BaCGydF4y2Ba70天叶子的血浆膜，GydF4y2BaD.GydF4y2Ba90天叶片的质膜GydF4y2Ba

全尺寸图像GydF4y2Ba

讨论GydF4y2Ba

使用两相含水聚合物技术分离血浆膜囊泡[GydF4y2Ba25GydF4y2Ba据报道，在产量和组合方面产生均匀材料[GydF4y2Ba26GydF4y2Ba]．然而，从植物组织中分离出来的囊泡可能因植物类型而异[GydF4y2Ba20.GydF4y2Ba]，器官和培养条件[GydF4y2Ba22GydF4y2Ba]．在我们的作品中，从成年植物获得的囊泡比以前从幼苗获得的囊泡更大[GydF4y2Ba22GydF4y2Ba]．此外，从花序获得的囊泡的尺寸小于叶片的尺寸较小但更异。此外，从花序的囊泡产量是来自叶子的两倍（数据未显示）。虽然这些结果可能是由于细胞大小和组织瘫痪的差异，但在植物生理学研究中可能是不重要的，如果工业应用被认为是重要的[GydF4y2Ba27GydF4y2Ba]．GydF4y2Ba

质膜的主要功能之一是调节各种分子和水通过它的通过。这GydF4y2BaPF.GydF4y2Ba通常是用来描述由渗透梯度驱动的植物膜分离囊泡的水通量的参数[GydF4y2Ba28GydF4y2Ba]．事实上，应用于我们的囊泡的渗透冲击不应产生任何抑制据报道的对流的小孔，以导致囊泡破裂[GydF4y2Ba29GydF4y2Ba]．由Martínez-Ballesta等人源自西兰花叶的血浆膜囊泡。[GydF4y2Ba30.GydF4y2Ba] 有GydF4y2BaPF.GydF4y2Ba类似于我们工作中获得的值。然而，这是GydF4y2BaPF.GydF4y2Ba用于衍生自70天和90天花序的血浆膜囊泡的值分别比90天叶中的囊泡分别为1.6倍和2.5倍。从很少或没有信息GydF4y2BaPF.GydF4y2Ba在原生质体或囊泡中衍生自GydF4y2Ba芸苔属植物GydF4y2Ba花序存在，这些结果揭示了这件事。类似的价值GydF4y2BaPF.GydF4y2Ba已经报道了从辣椒根获得的血浆膜囊泡和原生质体（30和40μmsGydF4y2Ba−1GydF4y2Ba)[GydF4y2Ba31GydF4y2Ba]．此外，GydF4y2BaPF.GydF4y2Ba值高达540μmsGydF4y2Ba−1GydF4y2Ba在质膜中发现的GydF4y2BaBeta寻常魅力GydF4y2Ba根[GydF4y2Ba32GydF4y2Ba]．这表明花序中的水渗透渗透性可能与根中的渗透性相似，因为它们需要水以维持Turgor。实际上，已经报道了在共聚合物组织和细胞分裂中细胞Turgor之间的关系[GydF4y2Ba33GydF4y2Ba]．GydF4y2Ba

影响生物膜物理特性的主要结构成分之一是脂肪酸。不同饱和脂肪酸和不饱和脂肪酸的比例可能会影响双分子层的渗透性[GydF4y2Ba34GydF4y2Ba]．在我们的研究中，从花椰菜获得的血浆膜囊泡具有高比例的不饱和脂肪酸，其提供更大的流动性[GydF4y2Ba35GydF4y2Ba]．在来自其他物种的叶血浆膜 - 如西兰花，GydF4y2BaCakile MaritimaGydF4y2Ba土地GydF4y2Ba芸苔栗鸟GydF4y2BaL. - 亚麻酸（C18：3）是次要组分[GydF4y2Ba20.GydF4y2Ba]．而花椰菜叶片和花序形成的质膜泡中该脂肪酸的比例较大。这种脂肪酸分布的差异可能对温度变化有保护作用，因为之前的研究是在作物室内进行的，但我们在田间种植花椰菜;低温胁迫下桃果实中亚麻酸(C18:3)含量增加[GydF4y2Ba36GydF4y2Ba]．而且，更大程度的不饱和度产生了多不饱和碳链的松动包装，降低了与其他分子的相互作用，并允许水渗透到双层[GydF4y2Ba37GydF4y2Ba];这可能与更高的相关关系GydF4y2BaPF.GydF4y2Ba．但是，事实上GydF4y2BaPF.GydF4y2Ba90天的花序比在70天的花序中更高，必须与水通道蛋白存在相关。在我们的囊泡中，源于花椰菜，叶子（C18：1）比例低于报道GydF4y2Ba芸苔属植物oleraceaGydF4y2BaL. var。在Chalbi等人的Italica。[GydF4y2Ba20.GydF4y2Ba]．比较数据时GydF4y2BaB. Oleracea.GydF4y2Bavar。Italica离开[GydF4y2Ba20.GydF4y2Ba由于油酸含量较低(70天和90天叶的油酸含量分别为5.95±0.13和89.1±5.76，而西兰花叶的油酸含量为1.19±0.18)，花椰菜的不饱和脂肪酸含量较高。同样，不饱和脂肪酸的比例对DBI也有影响。在我们的分析中，最高的DBI发现在70天的叶片，因为亚麻酸(C18:3)的百分比在该样品中高于GydF4y2BaB. Oleracea.GydF4y2Bavar。Italica（48.08±0.64％Vs 5.52±0.8％）。在先前的大豆研究中（GydF4y2Ba甘氨酸最大GydF4y2BaL.）血浆膜，未观察到油酸（C18：1）的升高，并观察到亚油酸（C18：2）和亚麻酸（C18：3）的降低[GydF4y2Ba38GydF4y2Ba]，这可能导致膜刚性的增加。自从Chalbi等人学习的植物以来。[GydF4y2Ba20.GydF4y2Ba]在受控环境室中生长，脂质比例可能与该领域中栽培的植物的比例完全不同，其中气候条件如温度和湿度，是高度可变的。GydF4y2Ba

固醇也有助于双分子层的通透性[GydF4y2Ba26GydF4y2Ba]．已经研究了坎贝特尔关于其对增加脂质化双层的空间组织的贡献，因此，其顺序[GydF4y2Ba39GydF4y2Ba]．此外，通过脂膜的离子渗透性降低，它已被连接[GydF4y2Ba40GydF4y2Ba]．在我们的研究中，90天花椰菜花序的质膜中每毫克蛋白质中甘油三酯的含量最高。这可能是由于油菜固醇的双重功能，它既是一种结构成分，也是植物正常发育所必需的油菜素内酯激素的前体[GydF4y2Ba41GydF4y2Ba]．正如已报告的那样GydF4y2Ba拟南芥，GydF4y2Ba油菜素内酯有助于根分生组织的生长[GydF4y2Ba42GydF4y2Ba]．脊柱甾醇/β-谷甾醇比在花序的血浆膜中高得多，主要是在年轻人（70 d）中，可能导致增加GydF4y2BaPF.GydF4y2Ba．事实上，由于膜以及水蛋白蛋白的膜以及水蛋白的主要调节剂，已经指出了谷甾醇[GydF4y2Ba26GydF4y2Ba那GydF4y2Ba43GydF4y2Ba]．然而，事实上，最高的PGydF4y2BaFGydF4y2Ba结果表明，90天花序的谷甾醇/豆甾醇比值较低，水通道蛋白对水分运输的贡献较大。GydF4y2Ba

通过HPLC-ESI-QTOF-MS进行的蛋白质组学分析，分析并根据其细胞位置分析每个样品中的整体批定蛋白质（图。GydF4y2Ba1GydF4y2Ba）.然而，由于缺乏信息，少量蛋白质不能被分配给每个分数中的定义类别。尽管在所有样品中鉴定了高百分比的膜蛋白（42-44％），但也发现了可溶性蛋白质的显着存在（40-49％）。这可以被认为是膜样品的污染，但鉴定的蛋白质的数量高，总量应非常低。GydF4y2Ba

此外，我们基于血浆膜鉴定蛋白质内的功能类别分类蛋白质（图。GydF4y2Ba4.GydF4y2Ba)[GydF4y2Ba23GydF4y2Ba]．检测到不同转运蛋白的存在（11-19％）;这些包括跨膜离子转运蛋白和离子通道，也主要位于质膜中。检测到的转运蛋白的数量揭示了花序的降低。这可能与组织的专业相关，因为共聚合物组织（花序）可能需要较低的血浆膜转运蛋白。GydF4y2Ba

桌子GydF4y2Ba3.GydF4y2Ba显示含有花椰菜花粉和叶子的血浆膜提取物中鉴定的水蛋白蛋白。随着PIPS Aquaporins显示出非常保守的结构，胰蛋白酶酶和溶解的消化在所有这些中也非常相似。虽然知识的所有序列GydF4y2BaB. Oleracea.GydF4y2BaAquaporins非常有用，可以研究MIPS同种型的存在，并且肽的分析显示了五个PIP1同种型（PIP1; 1，PIP1; 2，PIP1; 3，PIP1; 4，以及PIP1; 5）（表GydF4y2Ba3.GydF4y2Ba），由于PIP1亚家族内的高同源性，我们无法明确识别异构型。此外，在我们的血浆膜样品中鉴定了两次提示。由于尖端通常位于调色板中[GydF4y2Ba44GydF4y2Ba，它们的存在可能与液泡污染有关。然而，在豌豆子叶的质膜中发现了TIPs [GydF4y2Ba45GydF4y2Ba]指出在我们的质膜中存在提示的可能性。GydF4y2Ba

此外，PIP2亚家族蛋白仅在花序中发现（表GydF4y2Ba3.GydF4y2Ba），特别是pip2; 5和pip2; 7。其中，只有PIP2; 7明确识别;该水素已被证明主要表达GydF4y2BaB. Oleracea.GydF4y2Ba花朵 [GydF4y2Ba46GydF4y2Ba]．此外，当PIP2;7在GydF4y2BaA. Thaliana.GydF4y2Ba液压导电率增加六倍，显示PIP2的重要作用; 7在水上运输。GydF4y2Ba

进一步从免疫印迹获得有关烧瓶膜中的血浆膜水色蛋白的更多信息（图。GydF4y2Ba5.GydF4y2Ba）.结果表明，叶片1存在于叶子和花序中，尽管其在花序中的密度较低。叶子中的提高蛋白质的存在可以通过其在CO中的监管作用来解释GydF4y2Ba2GydF4y2Ba运输 [GydF4y2Ba47GydF4y2Ba]．这件事GydF4y2Ba2GydF4y2Ba在叶片中，光合作用离不开运输，而在花序中，细胞不断分裂和生长会产生COGydF4y2Ba2GydF4y2Ba这需要携带到叶子。此外，其他PIP1成员已被假定为O.GydF4y2Ba2GydF4y2Ba交通协调员;特别是烟草植物中的PIP1;3 [GydF4y2Ba48GydF4y2Ba]．GydF4y2Ba

此外，PIP2的结果显示，来自花序的样本密度更大——这反映了在蛋白质组学分析中获得的信息——其中PIP2只能在这些样本中检测到(图2)。GydF4y2Ba5.GydF4y2Ba）.PIP2蛋白在花序中的所有鉴定（PIP2; 1，PIP2; 2，PIP2; 5和PIP2; 7）可以与花椰菜花序的水需求提高有关，以保持营养吸收和Turgor [GydF4y2Ba49GydF4y2Ba]．PIP2在来自花序的血浆膜样品中的定位（图。GydF4y2Ba5.GydF4y2Ba）也可以解释所观察到的差异GydF4y2BaPF.GydF4y2Ba；90天花序最高GydF4y2BaPF.GydF4y2Ba，根据这些样品中发现的较高浓度的PIP2（图。GydF4y2Ba3.GydF4y2Ba）.叶片中的PIP2的非检测可以指示点的功能通过尖端在此进行，或者仅发生脂质化双层的有限的水运输。但是，需要进一步调查该方面。GydF4y2Ba

结论GydF4y2Ba

综上所述，本研究揭示了花椰菜花序质膜中存在的不同元素在水分通道中发挥的关键作用。该膜具有低不饱和度的特点，这可能会增加硬度，减少水的运输，但高含量的谷甾醇(高度相关的水通道)将弥补这一事实。与此相关，在花序中大量存在水通道蛋白，特别是PIP2;5和PIP2;7，表明水通道蛋白在分生组织持续发展所需的水运输中具有潜在的作用。此外，水通道蛋白在花序中对水分运输的贡献肯定高于在叶片中，这一事实可能与发育阶段有关，为甾醇和水通道蛋白在发育中提供了特定的作用。我们的工作表明，在自然条件下，需要进一步研究与成体植物发育相关的特定水通道蛋白。GydF4y2Ba

可用性数据和材料GydF4y2Ba

在当前研究期间使用和/或分析的数据集可从合理的请求上从相应的作者获得。GydF4y2Ba

缩写GydF4y2Ba

DBI：GydF4y2Ba

双债券指数GydF4y2Ba

呃：GydF4y2Ba

内质网GydF4y2Ba

FID：GydF4y2Ba

火焰离子探测器GydF4y2Ba

HPLC：GydF4y2Ba

高效液相色谱GydF4y2Ba

MUFA：GydF4y2Ba

单一饱和脂肪酸GydF4y2Ba

PIP：GydF4y2Ba

血浆膜内在蛋白质GydF4y2Ba

PVP:GydF4y2Ba

聚乙烯吡咯烷酮GydF4y2Ba

RUFA：GydF4y2Ba

不饱和脂肪酸的比例GydF4y2Ba

SDS-PAGE：GydF4y2Ba

十二烷基硫酸钠 - 聚丙烯酰胺凝胶电泳GydF4y2Ba

TBS:GydF4y2Ba

Tween 20阻断溶液GydF4y2Ba

提示:GydF4y2Ba

Tonoplast内在蛋白质GydF4y2Ba

参考GydF4y2Ba

  1. 1。GydF4y2Ba

    Picchi V, Migliori C, Lo Scalzo R, Campanelli G, Ferrari V, Di Cesare LF。有机和常规种植的意大利花椰菜中的植物化学成分。食品化学。2012;130:501-9。GydF4y2Ba

    CASGydF4y2Ba文章GydF4y2Ba谷歌学术搜索GydF4y2Ba

  2. 2.GydF4y2Ba

    斯文博士。花卉发展：花椰菜的起源。Curr Biol。1995年; 5：361-3。GydF4y2Ba

    CASGydF4y2BaPubMedGydF4y2Ba文章GydF4y2Ba谷歌学术搜索GydF4y2Ba

  3. 3.GydF4y2Ba

    Anthony RG，James Pe，Jordan Br。花椰菜（Brassica Oleracea var。Botrytis L.）凝乳发展：分生形式基因的表达。J Exp Bot。1996年; 47：181-8。GydF4y2Ba

    CASGydF4y2Ba文章GydF4y2Ba谷歌学术搜索GydF4y2Ba

  4. 4.GydF4y2Ba

    Thorwarth P，Yousef Eaa，Schmid KJ。Cailiflower基因库中凝乳相关性状的基因组预测和关联映射。G3基因|基因组|遗传学。2017; 8：707-18。GydF4y2Ba

    公共医学中心GydF4y2Ba文章GydF4y2BaCASGydF4y2BaPubMedGydF4y2Ba谷歌学术搜索GydF4y2Ba

  5. 5。GydF4y2Ba

    Grevsen K，Olesen Je，Veierskov B.温度和植物发育阶段对花椰菜凝乳质量缺陷“苞片”和“富含性”的影响。j hortic sci biotechnol。2003; 78：638-46。GydF4y2Ba

    文章GydF4y2Ba谷歌学术搜索GydF4y2Ba

  6. 6。GydF4y2Ba

    Ratajczak r，hinz g，robinson dg。花椰菜花粉细胞膜中焦磷酸酶的定位。Planta。1999; 208：205-11。GydF4y2Ba

    CASGydF4y2BaPubMedGydF4y2Ba文章GydF4y2Ba谷歌学术搜索GydF4y2Ba

  7. 7。GydF4y2Ba

    Komatsu S，Konishi H，Hashimoto M.植物细胞膜的蛋白质组学。J Exp Bot。2007; 58：103-12。GydF4y2Ba

    CASGydF4y2BaPubMedGydF4y2Ba文章GydF4y2Ba谷歌学术搜索GydF4y2Ba

  8. 8.GydF4y2Ba

    Maurel C，Tacnet F，GüclüJ，juern J，Ripoche p.烟草电池真空和血浆膜的纯化囊泡显着不同的水渗透性和水通道活性。Proc Natl Acad Sci U S A. 1997; 94：7103-8。GydF4y2Ba

    CASGydF4y2BaPubMedGydF4y2Ba公共医学中心GydF4y2Ba文章GydF4y2Ba谷歌学术搜索GydF4y2Ba

  9. 9.GydF4y2Ba

    花椰菜(Brassica oleracea L. var. botrytis)液泡膜固有蛋白的免疫学分析、cDNA克隆及在分生组织表达的证据。足底。1998;204:335-44。GydF4y2Ba

    CASGydF4y2BaPubMedGydF4y2Ba文章GydF4y2Ba谷歌学术搜索GydF4y2Ba

  10. 10。GydF4y2Ba

    carvajal m，cooke dt，clarkson dt。小麦植物对营养剥夺的反应可能涉及对水通道功能的调节。Planta。1996; 199：372-81。GydF4y2Ba

    CASGydF4y2Ba文章GydF4y2Ba谷歌学术搜索GydF4y2Ba

  11. 11.GydF4y2Ba

    SánchezSA，Tricerri Ma，Ossato G，Gratton E.脂质包装决定蛋白质 - 膜相互作用：脂蛋白A-I和高密度脂蛋白的挑战。Biochim Biophys Acta Biomembr。1798; 2010：1399-408。GydF4y2Ba

    谷歌学术搜索GydF4y2Ba

  12. 12.GydF4y2Ba

    Phillips R，Ursell T，Wiggins P，Sens P.脂质在成型膜 - 蛋白质功能中的出现作用。自然。2009; 459：379-85。GydF4y2Ba

    CASGydF4y2BaPubMedGydF4y2Ba公共医学中心GydF4y2Ba文章GydF4y2Ba谷歌学术搜索GydF4y2Ba

  13. 13.GydF4y2Ba

    Silva C，Aranda FJ，Ortiz A，Martínezv，Carvajal M，Teruel Ja。植物甾醇与DPPC双层之间的相互作用的分子方面。一种实验与理论方法。J COLDOIT接口SCI。2011; 358：192-201。GydF4y2Ba

    CASGydF4y2BaPubMedGydF4y2Ba文章GydF4y2Ba谷歌学术搜索GydF4y2Ba

  14. 14.GydF4y2Ba

    Khmelinskaia A, Marquês JMT, Bastos AEP, Antunes CAC, Bento-Oliveira A, Scolari S, et al。哺乳动物和酵母甾醇的液体有序相形成:组织差异的共同特征。Front Cell Dev Biol. 2020;8:337。GydF4y2Ba

    PubMedGydF4y2Ba公共医学中心GydF4y2Ba文章GydF4y2Ba谷歌学术搜索GydF4y2Ba

  15. 15.GydF4y2Ba

    Claessens MMAE, Leermakers FAM, Hoekstra FA, Stuart MAC.由二油酰磷脂酰甘油和胆固醇组成的巨大囊泡的渗透收缩和再膨胀。生物化学学报。2008:890-5。GydF4y2Ba

    谷歌学术搜索GydF4y2Ba

  16. 16。GydF4y2Ba

    脂质双分子层的结构。生物物理学报。2000;1469:159-95。GydF4y2Ba

    CASGydF4y2Ba文章GydF4y2Ba谷歌学术搜索GydF4y2Ba

  17. 17。GydF4y2Ba

    Reeve R.濒危野生动物和植物群（CITES）濒危物种国际贸易公约。在：制定条约工作：人权，环境和军备控制。剑桥：剑桥大学出版社;2007. p。134-60。GydF4y2Bahttps://doi.org/10.1017/cbo9780511494345.008.GydF4y2Ba．GydF4y2Ba

  18. 18。GydF4y2Ba

    Casado-Vela J，Muries B，Carvajal M，Iloro I，Elortza F，Martínez-Ballesta MC。从芸苔的根血浆膜水下蛋白分析：高分辨率质谱，翻译后修饰，de Novo测序和异构素的检测。J蛋白质组。2010; 9：3479-94。GydF4y2Ba

    CASGydF4y2BaPubMedGydF4y2Ba文章GydF4y2Ba谷歌学术搜索GydF4y2Ba

  19. 19.GydF4y2Ba

    Barrajón-cataláne，Menéndez-gutiérrezmp，falco a，Carrato A，Saceda M，Micol V.通过裂解免疫素体的人乳腺癌细胞的选择性死亡：与HER2表达水平相关。癌症吧。2010; 290：192-203。GydF4y2Ba

    PubMedGydF4y2Ba文章GydF4y2BaCASGydF4y2Ba谷歌学术搜索GydF4y2Ba

  20. 20。GydF4y2Ba

    Chalbi N，Martínez-Ballesta MC，Ben Yn，Carvajal M.铜绿素膜的内在稳定性与蛋白质和脂质的变化为盐度的反应。J植物理性。2015; 175：148-56。GydF4y2Ba

    CASGydF4y2BaPubMedGydF4y2Ba文章GydF4y2Ba谷歌学术搜索GydF4y2Ba

  21. 21。GydF4y2Ba

    Stetson I，Izquierdo-Rico MJ，Moros C，Chevret P，Lorenzo PL，Ballesta J等。兔Zona pellucida组成：分子，蛋白质组学和系统发育方法。J蛋白质组。2012; 75：5920-35。GydF4y2Ba

    CASGydF4y2Ba文章GydF4y2Ba谷歌学术搜索GydF4y2Ba

  22. 22。GydF4y2Ba

    Martínezbalestamc，García-gomez p，Yepes-Molina L，Guarnizo Al，Teruel Ja，Carvajal M.等离子膜水色蛋白在西兰花中介导囊泡稳定性。Plos一个。2018; 13：1-19。GydF4y2Bahttps://doi.org/10.1371/journal.pone.0192422GydF4y2Ba．GydF4y2Ba

    CASGydF4y2Ba文章GydF4y2Ba谷歌学术搜索GydF4y2Ba

  23. 23。GydF4y2Ba

    基因专一联盟。基因本体论资源:20年依旧强劲。核酸Res. 2019;47: D330-8。GydF4y2Ba

    文章GydF4y2BaCASGydF4y2Ba谷歌学术搜索GydF4y2Ba

  24. 24.GydF4y2Ba

    Muries B，Mohamed F，Carvajal M，Martínez-Ballesta MC。盐度在西兰花植物中盐度鉴定和差异诱导盐度。mol Biosyst。2011; 7：1322-35。GydF4y2Ba

    CASGydF4y2BaPubMedGydF4y2Ba文章GydF4y2Ba谷歌学术搜索GydF4y2Ba

  25. 25.GydF4y2Ba

    Larsson C，Widell S，Kjellbom P.高纯度血浆膜的制备。方法酶。1987年; 148：558-68。GydF4y2Ba

    CASGydF4y2Ba文章GydF4y2Ba谷歌学术搜索GydF4y2Ba

  26. 26.GydF4y2Ba

    Silva C, Aranda FJ, Ortiz A, Carvajal M, Martlnez V, Teruel JA。辣椒根质膜脂变化与水分运输的关系:对NaCI和CaCI2处理的响应acta botanica sinica(云南植物学报)2007;GydF4y2Ba

    CASGydF4y2Ba文章GydF4y2Ba谷歌学术搜索GydF4y2Ba

  27. 27.GydF4y2Ba

    RIOS JJ，Garcia-IbañezP，Carvajal M.使用生物膏来提高Zn叶面施肥的效率。胶体冲浪B生物界面。2019; 173：899-905。GydF4y2Ba

    CASGydF4y2BaPubMedGydF4y2Ba文章GydF4y2Ba谷歌学术搜索GydF4y2Ba

  28. 28。GydF4y2Ba

    Maurel C.植物膜的水氨素和透水性。Annu Rev植物植物植物Mol Biol。1997年; 48：399-429。GydF4y2Ba

    CASGydF4y2BaPubMedGydF4y2Ba文章GydF4y2Ba谷歌学术搜索GydF4y2Ba

  29. 29。GydF4y2Ba

    Bernard AL, Guedeau-Boudeville MA, Jullien L, Di Meglio JM。树莓囊泡。生物物理学报。2002;1567:1-5。GydF4y2Ba

    CASGydF4y2Ba文章GydF4y2Ba谷歌学术搜索GydF4y2Ba

  30. 30。GydF4y2Ba

    MartínezbalestaMc，Pérez-SánchezH，莫雷诺大，Carvajal M.植物血浆膜水质蛋白是天然囊泡的潜在稳定剂和葡萄糖苷的载体。胶体冲浪B生物界面。2016; 143：318-26。GydF4y2Ba

    PubMedGydF4y2Ba文章GydF4y2BaCASGydF4y2Ba谷歌学术搜索GydF4y2Ba

  31. 31。GydF4y2Ba

    Martínez-Ballesta MC，Cabañerof，奥米斯e，Periago pm，Maurel C，Carvajal M.钙在盐度呼出杂物植物中钙的两种不同效果。Planta。2008; 228：15-25。GydF4y2Ba

    PubMedGydF4y2Ba文章GydF4y2BaCASGydF4y2Ba谷歌学术搜索GydF4y2Ba

  32. 32。GydF4y2Ba

    Alleva K，Niemietz CM，Sutka M，Maurel C，Parisi M，Tyerman SD等。β寻常储存根的血浆膜显示通过​​细胞质pH调节的高水通道活性和双重范围的钙浓度。J Exp Bot。2006; 57：609-21。GydF4y2Ba

    CASGydF4y2BaPubMedGydF4y2Ba文章GydF4y2Ba谷歌学术搜索GydF4y2Ba

  33. 33。GydF4y2Ba

    Kutschera U，Niklas KJ。幼年植物中的细胞分裂和Turgor驱动的杆伸长：合成。植物SCI。2013; 207：45-56。GydF4y2Ba

    CASGydF4y2BaPubMedGydF4y2Ba文章GydF4y2Ba谷歌学术搜索GydF4y2Ba

  34. 34。GydF4y2Ba

    李Q，沉W，郑Q，福勒DB，邹J。植物适应温度应力的脂质途径调整。植物信号表现。2016; 11：E1058461。GydF4y2Ba

    PubMedGydF4y2Ba公共医学中心GydF4y2Ba文章GydF4y2BaCASGydF4y2Ba谷歌学术搜索GydF4y2Ba

  35. 35。GydF4y2Ba

    Stubbs CD，史密斯广告。哺乳动物膜多不饱和脂肪酸组合物与膜流动性和功能相关的改性。Biochim Biophys Acta。1984年; 779：89-137。GydF4y2Ba

    CASGydF4y2BaPubMedGydF4y2Ba文章GydF4y2Ba谷歌学术搜索GydF4y2Ba

  36. 36.GydF4y2Ba

    张C，田S.桃子果实通过亚麻酸和N-酰基磷脂酰乙醇胺在质膜中获得了低温胁迫的耐受性。食品化学。2010; 120：864-72。GydF4y2Ba

    CASGydF4y2Ba文章GydF4y2Ba谷歌学术搜索GydF4y2Ba

  37. 37.GydF4y2Ba

    壳D，Jin AJ，Arnold K，Gawrisch K.通过17OnMR测量的多不饱和脂质膜的渗透性。Biophys J. 1997; 73：855-64。GydF4y2Ba

    CASGydF4y2BaPubMedGydF4y2Ba公共医学中心GydF4y2Ba文章GydF4y2Ba谷歌学术搜索GydF4y2Ba

  38. 38.GydF4y2Ba

    Rajcan I，Hou G，Weir广告。大豆种子质量性状的育种进展。J作物加速。2005; 14：221-47。GydF4y2Ba

    文章GydF4y2Ba谷歌学术搜索GydF4y2Ba

  39. 39.GydF4y2Ba

    Grosjean K，Mongrand S，Beney L，Simon-Plas F，Gerbeau-Pissot P.植物脂质对植物组织植物组织植物和植物甾醇的差异效果。J Biol Chem。2015; 290（9）：5810-25。GydF4y2Ba

    CASGydF4y2BaPubMedGydF4y2Ba公共医学中心GydF4y2Ba文章GydF4y2Ba谷歌学术搜索GydF4y2Ba

  40. 40。GydF4y2Ba

    王志强，王志强，王志强，等。甾醇对脂质双分子膜离子转运的影响。生物化学学报，1978;506:265-80。GydF4y2Ba

    CASGydF4y2BaPubMedGydF4y2Ba文章GydF4y2Ba谷歌学术搜索GydF4y2Ba

  41. 41。GydF4y2Ba

    Zullo Mat，Bajguz A.芸苔类固体系列 - 天然化合物的结构多样性及其前体。在：Brassinosteroids：植物生长和发展。纽约市：斯普林克美国;2019. p。1-44。GydF4y2Ba

  42. 42。GydF4y2Ba

    蔡万农，王志勇。拟南芥中油菜素内酯的时空信号转导及其与生长素模式干细胞动态的拮抗作用。咕咕叫医学杂志。2015;25:1031-42。GydF4y2Ba

    CASGydF4y2BaPubMedGydF4y2Ba公共医学中心GydF4y2Ba文章GydF4y2Ba谷歌学术搜索GydF4y2Ba

  43. 43。GydF4y2Ba

    López-pérezl，费尔诺德斯 - 加西亚，奥莫斯·伊莫斯·凯斯瓦尔M.西兰花植物根源的PHI加厚：盐度的适应机制？int j植物sci。2007; 168：1141-9。GydF4y2Ba

    文章GydF4y2BaCASGydF4y2Ba谷歌学术搜索GydF4y2Ba

  44. 44。GydF4y2Ba

    Chaumont F, Barrieu F, Herman EM, Chrispeels MJ。玉米液泡膜水通道蛋白在细胞分裂和伸长区表达的特性。植物杂志。1998;117:1143-52。GydF4y2Ba

    CASGydF4y2BaPubMedGydF4y2Ba公共医学中心GydF4y2Ba文章GydF4y2Ba谷歌学术搜索GydF4y2Ba

  45. 45。GydF4y2Ba

    Robinson DG，Haschke HP，Hinz G，Hoh B，Maeshima M，Marty F.豌豆子叶质膜中铜绿膜的免疫学检测。Planta。1996; 198：95-103。GydF4y2Ba

    CASGydF4y2Ba谷歌学术搜索GydF4y2Ba

  46. 46。GydF4y2Ba

    Diehn Ta，Pommerrenig B，Bernhardt N，Hartmann A，Bienert GP。甘蓝型甘蔗酸盐蛋白的基因组鉴定和甘蓝型作物和拟南芥的系统发育序列比较。前植物SCI。2015; 6：1-20。GydF4y2Ba

    文章GydF4y2Ba谷歌学术搜索GydF4y2Ba

  47. 47。GydF4y2Ba

    拟南芥水通道蛋白PIP1;2调控细胞二氧化碳吸收。植物学报2012;35:1077-83。GydF4y2Ba

    CASGydF4y2BaPubMedGydF4y2Ba文章GydF4y2Ba谷歌学术搜索GydF4y2Ba

  48. 48.GydF4y2Ba

    Tyerman SD, Wignes JA, Kaiser BN。根系水分和水通道蛋白对氮有效性的响应。:植物水通道蛋白。植物的信号与通讯。可汗:施普林格;2017.207 - 36页。GydF4y2Ba

    章节GydF4y2Ba谷歌学术搜索GydF4y2Ba

  49. 49.GydF4y2Ba

    陈志强，陈志强。甜樱桃果实细胞壁膨大的影响因素及机制。足底。2020;251:65。GydF4y2Ba

    CASGydF4y2BaPubMedGydF4y2Ba文章GydF4y2Ba谷歌学术搜索GydF4y2Ba

下载参考GydF4y2Ba

确认GydF4y2Ba

作者感谢D. D. Walker在稿件中更正英语。GydF4y2Ba

资金GydF4y2Ba

这项工作由西班牙CDTI (BIOTAGUT)和西班牙Ministerio de Ciencia (Innovación y Universidades)资助(AGL2016-80247-C2-1-R)，用于研究、收集、分析和撰写手稿。P. García-Ibañez是由西班牙Fundación Séneca-CARM (21273/FPI/19)资助的，用于解释数据和撰写手稿。GydF4y2Ba

作者信息GydF4y2Ba

隶属关系GydF4y2Ba

  1. Aquaporins Group，Centro deEdafologíayBiologíaAplicadadel Segura，Cebas-CSIC，校园大学德埃斯特·德·斯特·奥斯卡多 - 25，穆尔西亚，西班牙穆尔西亚GydF4y2Ba

    Paula Garcia-Ibañez, Juan Nicolas-Espinosa和Micaela CarvajalGydF4y2Ba

作者GydF4y2Ba
  1. Paula garcia-ibañezGydF4y2Ba
    查看作者出版物GydF4y2Ba

    您还可以搜索此作者GydF4y2BaPubMedGydF4y2Ba谷歌学术搜索GydF4y2Ba

  2. Juan Nicolas-EspinosaGydF4y2Ba
    查看作者出版物GydF4y2Ba

    您还可以搜索此作者GydF4y2BaPubMedGydF4y2Ba谷歌学术搜索GydF4y2Ba

  3. Micaela Carvajal.GydF4y2Ba
    查看作者出版物GydF4y2Ba

    您还可以搜索此作者GydF4y2BaPubMedGydF4y2Ba谷歌学术搜索GydF4y2Ba

贡献GydF4y2Ba

MCA为这项工作的概念和设计做出了贡献。PGI进行了实验，JNE进行了蛋白质组学的分析工作。PGI和JNE准备的数字和桌子，并准备了稿件的第一稿。MCA为手稿修订贡献，读取并批准了提交的版本。MCA获得了资金。所有作者都读过并批准了稿件。GydF4y2Ba

通讯作者GydF4y2Ba

对应于GydF4y2BaMicaela Carvajal.GydF4y2Ba．GydF4y2Ba

道德声明GydF4y2Ba

伦理批准和同意参与GydF4y2Ba

不适用。GydF4y2Ba

同意出版物GydF4y2Ba

不适用。GydF4y2Ba

利益争夺GydF4y2Ba

提交人声明他们没有竞争利益。GydF4y2Ba

附加信息GydF4y2Ba

出版商的注意事项GydF4y2Ba

Springer Nature在发表地图和机构附属机构中的司法管辖权索赔方面仍然是中立的。GydF4y2Ba

补充信息GydF4y2Ba

附加文件1：图S1。GydF4y2Ba

蛋白质分类在花椰菜血浆隔离囊泡中鉴定。鉴定的蛋白质基于三个类别对应于基因本体数据库中可用的信息[GydF4y2Ba23GydF4y2Ba]．（a）70天的花序，（b）90天花序，（c）70天叶子，（d）90天叶子。图设计设计已经使用原产地（Pro），版本2019.IniginLab Corporation，北安普敦，美国。GydF4y2Ba图S2。GydF4y2Ba皮肤水膜囊泡中PIP1和PIP2 Aquaporins的免疫印迹分析的原始图像。- 答：来自70天花序的血浆膜，B：来自90天花序的血浆膜，C：70天叶子的血浆膜，D：90天叶子的血浆膜。GydF4y2Ba表S1。GydF4y2Ba含水聚合物两相分配方法后，血浆膜的酶活性（Nmol MIN-1mg-1蛋白）的平均值和在净化级分中测量的微粒体级分。GydF4y2Ba

权利和权限GydF4y2Ba

开放获取GydF4y2Ba本文根据创意公约归因于4.0国际许可证，这允许在任何中或格式中使用，共享，适应，分发和复制，只要您向原始作者和来源提供适当的信贷，提供了一个链接到Creative Commons许可证，并指出是否进行了更改。除非信用额度另有说明，否则本文中的图像或其他第三方材料包含在文章的创造性公共许可证中，除非信用额度另有说明。如果物品不包含在物品的创造性的公共许可证中，法定规定不允许您的预期用途或超过允许使用，您需要直接从版权所有者获得许可。要查看本许可证的副本，请访问GydF4y2Bahttp://creativecommons.org/licenses/by/4.0/GydF4y2Ba．创作共用及公共领域专用豁免书(GydF4y2Bahttp://creativecommons.org/publicdomain/zero/1.0/GydF4y2Ba）适用于本文中提供的数据，除非另有用入数据的信用额度。GydF4y2Ba

再版和权限GydF4y2Ba

关于这篇文章GydF4y2Ba

通过CrossMark验证货币和真实性GydF4y2Ba

引用这篇文章GydF4y2Ba

Garcia-ibañez，P.，Nicolas-Espinosa，J.＆Carvajal，M.来自花椰菜的血浆膜囊泡来自花椰菜的共同组织及其在水段中的作用。GydF4y2BaBMC植物BIOL.GydF4y2Ba21，GydF4y2Ba30（2021）。https://doi.org/10.1186/s12870-020-02778-6GydF4y2Ba

下载引用GydF4y2Ba

关键词GydF4y2Ba

  • 等离子体膜GydF4y2Ba
  • 水素蛋白GydF4y2Ba
  • 芸苔属植物GydF4y2Ba
  • 渗透渗透率GydF4y2Ba

BMC植物生物学GydF4y2Ba

ISSN: 1471 - 2229GydF4y2Ba

联系我们GydF4y2Ba