SLGT11gydF4y2Ba控制番茄花器官模式和花的决定性gydF4y2Ba

背景gydF4y2Ba

花的发育直接影响番茄果实的生产。尽管在拟南芥中已经建立了ABC基因介导的框架，但番茄花发育的时空精度尚未得到很好的研究。gydF4y2Ba

结果gydF4y2Ba

在这里，我们分析了一种新的番茄gydF4y2Bastamenless像花gydF4y2Ba（gydF4y2BaSLF.gydF4y2Ba）雄蕊和心皮的突变体受到干扰，在第三螺纹中形成的胭脂蛋白结构，在第四轮螺旋中形成的花香和拍摄顶端公司。使用膨胀的分析分析（BSA），我们为基因分配了因果突变gydF4y2BaSolanum lycopersicum gt11gydF4y2Ba（gydF4y2BaSLGT11gydF4y2Ba）编码属于Trihelix基因家族的转录因子。gydF4y2BaSLGT11gydF4y2Ba在花发育的早期阶段表达，在花发育的后期与雄蕊和心皮相对应的原基位置更加特异。进一步的RNAi沉默gydF4y2BaSLGT11gydF4y2Ba验证缺陷的表型gydF4y2BaSLF.gydF4y2Ba变种人。心皮状雄蕊gydF4y2BaSLF.gydF4y2Ba突变体表明第三轮螺纹中的B函数活性需要SLGT11。花分生组织终止失败和花反转的发生gydF4y2BaSLF.gydF4y2Ba表示C函数的一部分需要第四轮中的SLGT11活动。此外，我们发现在更高的温度下，缺陷gydF4y2BaSLF.gydF4y2Ba突变体显著增强，花瓣转化为萼片，雄蕊全部消失，第四轮异位茎/花分生组织频率增加，说明SlGT11在三个内花轮的发育中起作用。与观察到的表型一致，发现B、C和E型MADS-box基因在小鼠体内部分下调gydF4y2BaSLF.gydF4y2Ba变种人。gydF4y2Ba

结论gydF4y2Ba

结合时空表达模式，我们建议gydF4y2BaSLGT11gydF4y2Ba花式器官图案化的功能与番茄花卉测定维护。gydF4y2Ba

高管花朵是生殖器官在繁殖中发挥着重要作用。一个典型的edicot花，如gydF4y2Ba拟南芥gydF4y2Ba和番茄，由四个不同的器官组成，排列在花卉射击尖端的四个螺纹中。基于遗传学研究模型植物，包括gydF4y2Ba拟南芥gydF4y2Ba［gydF4y2Ba1gydF4y2Ba，gydF4y2Ba2gydF4y2Ba，gydF4y2Ba3.gydF4y2Ba]，gydF4y2BaAntirrhinum Majus.gydF4y2Ba［gydF4y2Ba1gydF4y2Ba] 和gydF4y2Ba佩妮混合gydF4y2Ba［gydF4y2Ba4gydF4y2Ba]是涉及ABCDE类基因的优雅模型，已经提出解释花的器官图案。在gydF4y2Ba拟南芥gydF4y2Ba， A类基因gydF4y2BaApetala1.gydF4y2Ba（gydF4y2BaAP1.gydF4y2Ba） 和gydF4y2BaApetala2.gydF4y2Ba（gydF4y2BaAP2.gydF4y2Ba）参与萼片和花瓣的发展。B类基因gydF4y2BaApetala3.gydF4y2Ba（gydF4y2BaAP3.gydF4y2Ba） 和gydF4y2BaPISTILLATAgydF4y2Ba（gydF4y2Ba圆周率gydF4y2Ba）可以用C类基因形成蛋白质复合物gydF4y2Ba无性生殖的gydF4y2Ba（gydF4y2BaAG)gydF4y2Ba）和e类基因gydF4y2BaSepallatas.gydF4y2Ba（gydF4y2BaSEPS.gydF4y2Ba）促进雄蕊开发。组成的形成由C类基因进行调节gydF4y2BaAGS.gydF4y2Ba和E类基因gydF4y2BaSEPS.gydF4y2Ba．ABCDE基因的干扰导致花器官身份的混乱[gydF4y2Ba3.gydF4y2Ba，gydF4y2Ba5gydF4y2Ba]．和....相比gydF4y2Ba拟南芥gydF4y2Ba，番茄基因组具有更加同源的ABCDE基因。番茄拥有四个B级同源基因，两种DEF谱系 -gydF4y2Ba番茄阿普拉拉3.gydF4y2Ba（gydF4y2BaTap3.gydF4y2Ba） 和gydF4y2Ba番茄MADS-box 6gydF4y2Ba（gydF4y2BaTM6.gydF4y2Ba)，两个GLO基因gydF4y2BaSolanum Lycopersicum球状gydF4y2Ba（gydF4y2BaTPIB，SLGLO1gydF4y2Ba） 和gydF4y2Ba番茄开枪gydF4y2Ba（gydF4y2BaTPI，SLGLO2gydF4y2Ba）[gydF4y2Ba6gydF4y2Ba，gydF4y2Ba7gydF4y2Ba]．在番茄中，有两种C类同源基因（gydF4y2Ba番茄糯1.gydF4y2Ba（gydF4y2Ba标签1gydF4y2Ba） 和gydF4y2Ba番茄AGAMOUS-LIKE 1gydF4y2Ba（gydF4y2Batagl1.gydF4y2Ba））[gydF4y2Ba8gydF4y2Ba，gydF4y2Ba9gydF4y2Ba]和六个阶级同源基因（gydF4y2Ba番茄MADS-box 5gydF4y2Ba（gydF4y2BaTM5gydF4y2Ba），gydF4y2BaTM29gydF4y2Ba，gydF4y2Ba无缝-2gydF4y2Ba（gydF4y2BaJ2.gydF4y2Ba），gydF4y2Ba增强 - 无缝2gydF4y2Ba（gydF4y2BaEJ2gydF4y2Ba），gydF4y2Ba成熟抑制剂gydF4y2Ba（gydF4y2Ba凛gydF4y2Ba） 和gydF4y2Basolyc04g005320.gydF4y2Ba）[gydF4y2Ba10.gydF4y2Ba]．虽然ABC基因明显具有相似的功能gydF4y2Ba拟南芥gydF4y2Ba和番茄，他们可能有独立的函数彼此独立。gydF4y2Ba

由于这两种花卉部件的调节，雄蕊和卡片的发展特别关注，因此这两种花卉部件对作物育种很重要。在gydF4y2Ba拟南芥gydF4y2Ba，B类基因中的突变gydF4y2BaApetala3.gydF4y2Ba（gydF4y2BaAP3.gydF4y2Ba） 或者gydF4y2BaPISTILLATAgydF4y2Ba（gydF4y2Ba圆周率gydF4y2Ba)促进花瓣转化为萼片，雄蕊转化为心皮[gydF4y2Ba1gydF4y2Ba]．同样，番茄gydF4y2Ba稳压gydF4y2Ba经鉴定，该突变体具有B类基因突变gydF4y2BaTap3.gydF4y2Ba［gydF4y2Ba11.gydF4y2Ba，gydF4y2Ba12.gydF4y2Ba]．在突变体中，雄蕊完全转化为与第四螺纹中的心脏融合的心脏，以形成独特的雌蕊，并且花瓣部分转化为萼片[gydF4y2Ba11.gydF4y2Ba，gydF4y2Ba12.gydF4y2Ba]．另一个B类基因的沉默gydF4y2BaTM6.gydF4y2Ba还产生了类似的表型[gydF4y2Ba6gydF4y2Ba，gydF4y2Ba13.gydF4y2Ba]．B类基因的突变体gydF4y2Ba削弱gydF4y2Ba（gydF4y2BadefgydF4y2Ba） 和gydF4y2BaGLOBOSAgydF4y2Ba（gydF4y2Ba如果留意gydF4y2Ba）触发了同样的归属转换gydF4y2Ba金鱼草属植物gydF4y2Ba［gydF4y2Ba14.gydF4y2Ba]．米饭gydF4y2Bastamenless 1gydF4y2Ba（gydF4y2BaSL1.gydF4y2Ba）突变体表现出甲状腺和雄蕊的圆形转化对PALEA / LEMMA等器官和心皮，类似于B类基因的突变体gydF4y2BaSPW1型gydF4y2Ba［gydF4y2Ba15.gydF4y2Ba]．这些物种也报告了另一种类型的归属转型。在gydF4y2Ba拟南芥gydF4y2Ba，C级基因的突变体gydF4y2BaAG)gydF4y2Ba表明雄蕊和皮卡片被转化为花瓣和萼片[gydF4y2Ba1gydF4y2Ba]．这些表型非常相似gydF4y2Ba标签1gydF4y2Ba番茄突变体[gydF4y2Ba8gydF4y2Ba] 和gydF4y2Baagamous-like花gydF4y2Ba（gydF4y2BaaglfgydF4y2Ba）突变体gydF4y2BaMedicago truncatulagydF4y2Ba［gydF4y2Ba16.gydF4y2Ba]．gydF4y2Ba

花卉公司的启动和终止精确控制，以确保花卉的成功发展，其中一组转录因子是时尚协调的[gydF4y2Ba17.gydF4y2Ba]．在gydF4y2Ba拟南芥gydF4y2Ba，花卉分生（FM）的活动通过Wuschel-Clavata（WUS-CLV）信号通路维持，这在维持商业中的未分化细胞群体中起着关键作用[gydF4y2Ba18.gydF4y2Ba，gydF4y2Ba19.gydF4y2Ba]．此外,gydF4y2BaAG - 2gydF4y2Ba突变体中gydF4y2Ba拟南芥gydF4y2Ba在没有雄蕊的情况下生产花朵，表格与重新肌肉和花瓣形成不确定的花朵，表明AG对花卉公司的决定性非常重要[gydF4y2Ba20.gydF4y2Ba]．叶茂（LFY）基因与WUSCHEL（WUS）一起激活gydF4y2Ba无性生殖的gydF4y2Ba（gydF4y2BaAG)gydF4y2Ba）在花卉阶段3 [gydF4y2Ba21.gydF4y2Ba，gydF4y2Ba22.gydF4y2Ba]. 而在花发育的后期（从第6期开始），诱导gydF4y2Ba指关节gydF4y2Ba（gydF4y2Ba克伦民族联盟gydF4y2Ba） 经过gydF4y2BaAG)gydF4y2Ba对CM及时终止至关重要[gydF4y2Ba23.gydF4y2Ba]．另外，高gydF4y2BaAG)gydF4y2Ba水平间接调节WUS活动，以确保FM中的专业活动正常终止，其中一组调节因子包括Trithorax组蛋白Ultrapetala1（ULT1），BZIP转录因子Perianthia（PAN）和其他因素，如Rebelote（RBL）和其他因素眯眼（SQN）涉及[gydF4y2Ba24.gydF4y2Ba，gydF4y2Ba25.gydF4y2Ba，gydF4y2Ba26.gydF4y2Ba，gydF4y2Ba27.gydF4y2Ba，gydF4y2Ba28.gydF4y2Ba]．SEPALLATA3 (SEP3)和AG的四聚化对AG的功能至关重要，AG在花确定过程中激活crab CLAW (CRC)和KNU。此外，这些调节网络还在花发育过程中与植物激素相互作用。研究发现，在花发育过程中，生长素反应因子3 (AUXIN RESPONSE FACTOR 3, ARF3)受AG和AP2的转录调控，通过抑制细胞分裂素活性抑制WUS的表达[gydF4y2Ba29.gydF4y2Ba]．调节花发育的机制似乎在物种间是保守的。研究发现，KNU可与MINI ZINC FINGER (MIF)相互作用，发挥调控作用gydF4y2Ba沃斯gydF4y2Ba拟南芥和番茄之间的表达和这种机制是保守的[gydF4y2Ba30.gydF4y2Ba]．gydF4y2Ba

花卉恢复是一种不寻常的过程，其中犯了致力的花卉发展恢复到植物生长中，导致来自第一朵花的叶子或花序结构的生长[gydF4y2Ba31.gydF4y2Ba]．这种现象通常与各种环境条件相关，例如温度和光周期[gydF4y2Ba31.gydF4y2Ba]．例如，观察到花卉逆转gydF4y2Balfy-6型gydF4y2Ba和gydF4y2Baag-1gydF4y2Ba突变体的gydF4y2Ba拟南芥gydF4y2Ba在短日的条件下种植[gydF4y2Ba32.gydF4y2Ba]. 在天然异源多倍体中也观察到了花逆转现象gydF4y2Ba拟南芥suecicagydF4y2Ba，其中花基因的异常表达，包括gydF4y2BaAGL24型gydF4y2Ba，gydF4y2Baapelata1.gydF4y2Ba（gydF4y2BaAP1.gydF4y2Ba），gydF4y2Ba短暂的植物阶段gydF4y2Ba（gydF4y2Ba高级副总裁gydF4y2Ba） 和gydF4y2BaConstans1的抑制器gydF4y2Ba（gydF4y2BaSOC1gydF4y2Ba）被检测到[gydF4y2Ba33.gydF4y2Ba，gydF4y2Ba34.gydF4y2Ba]．与之不同gydF4y2Ba拟南芥gydF4y2Ba，gydF4y2Ba绿叶（LFY）gydF4y2Ba，gydF4y2Ba终端FLOWER1 (TFL1)gydF4y2Ba和gydF4y2BaAG)gydF4y2Ba在gydF4y2Ba凤仙花gydF4y2Ba似乎不参与终端开花和花卉决定性[gydF4y2Ba35.gydF4y2Ba]．在gydF4y2Ba佩妮矮牵牛gydF4y2Ba，共抑制花卉结合蛋白1（FBP2），是同源物gydF4y2Ba拟南芥gydF4y2Ba类似Sepallata的基因，导致新的花序从卡皮塞的腋生生长[gydF4y2Ba36.gydF4y2Ba]．在番茄中，下调gydF4y2BaTM29gydF4y2Ba，同源际gydF4y2Ba拟南芥gydF4y2BaSEPALLATA基因，也导致异位叶茎和花在果实中形成[gydF4y2Ba37.gydF4y2Ba]．gydF4y2Ba

在这项研究中，我们鉴定了一种番茄隐性突变体，具有基因的突变gydF4y2Basolyc03g006900.gydF4y2Ba它被命名为gydF4y2BaSolanum lycopersicum gt1gydF4y2Ba（gydF4y2BaSLGT11gydF4y2Ba)，编码一个属于三螺旋基因家族的转录因子[gydF4y2Ba38.gydF4y2Ba]．最近，一个突变体gydF4y2BaSLGT11gydF4y2BaorthologingydF4y2BaMedicago truncatulagydF4y2Ba据报道据报道，控制C函数基因表达，并被命名gydF4y2Baag静脉gydF4y2Ba（gydF4y2BaAGLFgydF4y2Ba）[gydF4y2Ba16.gydF4y2Ba]．在gydF4y2BaaglfgydF4y2Ba突变体，内轮的雄蕊和心皮分别被花瓣和萼片所取代，类似于植物的花表型gydF4y2Baag-1gydF4y2Ba突变体中gydF4y2Ba拟南芥gydF4y2Ba［gydF4y2Ba16.gydF4y2Ba，gydF4y2Ba20.gydF4y2Ba，gydF4y2Ba39.gydF4y2Ba]．结果表明，SlGT11的功能缺失导致了第2轮的高温花瓣为单萼片状，第3轮为carploid雄蕊，第4轮为茎状、叶状和花状结构的异位形成。结果显示，B、C和一个e型MADS-box基因在gydF4y2BaSLF.gydF4y2Ba突变体，我们得出结论gydF4y2BaSLGT11gydF4y2Ba在三个内部花螺纹的发展方面具有重要的功能。此外，时尚表达分析显示gydF4y2BaSLGT11gydF4y2Ba在花发育的早期，它在整个花中都有表达，而在花发育的后期，它在雄蕊和心皮的原基位置上的表达更加专一。我们的研究结果表明gydF4y2BaSLGT11gydF4y2Ba花式器官图案化的功能与番茄花卉测定维护。gydF4y2Ba

鉴定gydF4y2BaSLF.gydF4y2Ba突变体gydF4y2Ba

为了研究番茄花器官特性的调控机制，我们筛选了番茄EMS突变体文库[gydF4y2Ba40gydF4y2Ba]并鉴定出一个在雄蕊和雌蕊中存在同一性缺陷的突变体（TOMJPG2637-1），而与野生型（WT）相比，其同一性和萼片、花瓣的数目没有变化gydF4y2Ba（gydF4y2Ba如图。gydF4y2Ba1gydF4y2BaA-C，E，GgydF4y2Ba）gydF4y2Ba．在突变体中，雄蕊在第三轮出现严重的心皮状gydF4y2Ba（gydF4y2Ba如图。gydF4y2Ba1gydF4y2Baag)ydF4y2Ba）gydF4y2Ba. 从纵切面上，我们证实在第三轮中形成了雌蕊状结构gydF4y2Ba（gydF4y2Ba如图。gydF4y2Ba1gydF4y2BaA，BgydF4y2Ba）gydF4y2Ba．只有几朵花（〜22.95％）的稳定性结构仍然是突变体的第三螺纹，基于横截面的花朵gydF4y2Ba（gydF4y2Ba如图。gydF4y2Ba1gydF4y2BaB，DgydF4y2Ba）gydF4y2Ba．突变体的甲状腺脂肪剂，其具有更多局部的不规则水果和痕迹雄蕊结构后来形成了果实表面上的径向裂缝gydF4y2Ba（gydF4y2Ba如图。gydF4y2Ba1gydF4y2BacgydF4y2Ba）gydF4y2Ba．由于这种表型类似于先前报道gydF4y2Ba稳压gydF4y2Ba突变体(gydF4y2Ba11.gydF4y2Ba，gydF4y2Ba12.gydF4y2Ba]，我们因此命名为突变体gydF4y2Bastamenless像花gydF4y2Ba（gydF4y2BaSLF.gydF4y2Ba）gydF4y2Ba．gydF4y2Ba

另外，我们的组织学分析显示突变体在第四轮中形成了新的茎/花分生组织而不是心皮原基gydF4y2Ba（gydF4y2Ba如图。gydF4y2Ba1gydF4y2Ba．gGydF4y2Ba）gydF4y2Ba．异位射击/花卉公司gydF4y2BaSLF.gydF4y2Ba突变体产生异位异常的叶子和鲜花在第四轮，表明正常的花卉决定性丢失gydF4y2Ba（gydF4y2Ba如图。gydF4y2Ba1gydF4y2Ba．gGydF4y2Ba）gydF4y2Ba．结果，胭脂红雄蕊gydF4y2BaSLF.gydF4y2Ba突变体发育成单性果实，没有种子gydF4y2Ba（gydF4y2Ba如图。gydF4y2Ba1gydF4y2BaC，D，图。gydF4y2BaS1级gydF4y2Bac、 d级gydF4y2Ba）gydF4y2Ba．有趣的是，在类似腕骨的结构中，胚珠发育似乎是正常的gydF4y2BaSLF.gydF4y2Ba突变体。因此，我们试图使用WT花粉颗粒进行交叉授粉gydF4y2BaSLF.gydF4y2Ba突变体，并且仅获得少量种子。该结果可能是由于妨碍了花粉胚珠过程的异常挥发性结构（图。gydF4y2BaS1级gydF4y2Ba所有这些结果都表明gydF4y2BaSLF.gydF4y2Ba突变体几乎是无菌的。gydF4y2Ba

SLGT11gydF4y2Ba基因编码与花器官身份有关的调节因子gydF4y2Ba

鉴定中致病基因gydF4y2BaSLF.gydF4y2Ba在F2分离群体中，我们发现92个子代与WT相似，28个子代与WT相似gydF4y2BaSLF.gydF4y2Ba表型接近3：1孟德尔分离规则，表明表型gydF4y2BaSLF.gydF4y2Ba是由单个基因座的隐性突变引起的。通过膨胀分析测序（BSA-SEQ），我们鉴定了染色体3上的信号峰gydF4y2Ba（gydF4y2Ba如图。gydF4y2Ba2gydF4y2Baag)ydF4y2Ba）gydF4y2Ba．进一步的SNP分析将致病突变归因于该基因gydF4y2Basolyc03g006900.gydF4y2Ba它编码了先前名为SLGT11的核局部化的三螺纹转录因子[gydF4y2Ba38.gydF4y2Ba]，包含推定的GT1 DNA结合结构域和PKC激酶结构域（图。gydF4y2BaS3级gydF4y2Ba）.识别的2195BP位置的A至T替换形成终止密码子标签和mRNA水平gydF4y2BaSLGT11gydF4y2Ba突变体中的基因显着降低gydF4y2Ba（gydF4y2Ba如图。gydF4y2Ba2gydF4y2BaB，FgydF4y2Ba）gydF4y2Ba．进一步的测序分析证明了所有28个F2后代发生的基础替换gydF4y2BaSLF.gydF4y2Ba表型gydF4y2Ba（gydF4y2Ba如图。gydF4y2Ba2gydF4y2BacgydF4y2Ba）gydF4y2Ba. 烟草叶片亚细胞定位结果表明，SlGT11-GFP位于细胞核内，与DNA结合域的存在相一致gydF4y2Ba（gydF4y2Ba如图。gydF4y2Ba2gydF4y2BadgydF4y2Ba）gydF4y2Ba．gydF4y2Ba

进一步验证gydF4y2BaSLGT11gydF4y2Ba功能，我们用靶向C-末端的RNA干扰（RNAi）质粒转化为WT番茄gydF4y2BaSLGT11gydF4y2Ba．5个独立的转基因RNAi线路的表型与gydF4y2BaSLF.gydF4y2Ba变种人。qRT-PCR证实了基因表达的显著降低gydF4y2BaSLGT11gydF4y2Ba在RNAi线路gydF4y2Ba（gydF4y2Ba如图。gydF4y2Ba2gydF4y2BafgydF4y2Ba）gydF4y2Ba．观察到的表型包括第三轮螺纹中的胭脂醛雄蕊和从RNAi线（＃1和＃6）中的第四轮的新的分型形成。表明gydF4y2BaSLGT11gydF4y2Ba是导致雄蕊和心皮的发育缺陷的基因gydF4y2BaSLF.gydF4y2Ba（图。gydF4y2Ba2gydF4y2Bae）。此外，在转基因排1和＃6中也发现了异常的水果，表明这一点gydF4y2BaSLGT11gydF4y2Ba在规范花卉身份和花卉公司终止方面发挥着重要作用（图。gydF4y2Ba2gydF4y2BaG）。gydF4y2Ba

系统发育分析表明，所有SLGT11同源基因gydF4y2BaSolanaceae.gydF4y2Ba被分组到同一集群中gydF4y2Ba拟南芥gydF4y2Ba同源基因At5g51800属于较少相关的簇(图。gydF4y2BaS2级gydF4y2Ba）.与这种系统发育距离相一致，gydF4y2BaAT5G51800.gydF4y2Ba突变不会引起类似的花卉表型，表明该基因的功能在不同物种之间并不完全保守。SLGT11中氨基酸序列的比较分析gydF4y2BaSolanaceae.gydF4y2Ba显示N-末端GT1结构域和C末端PKC激酶结构域高度保守（图。gydF4y2BaS3级gydF4y2Ba）.gydF4y2Ba

空间和时间表情模式gydF4y2BaSLGT11gydF4y2Ba在番茄中gydF4y2Ba

检查表达式模式gydF4y2BaSLGT11gydF4y2Ba，我们在不同的番茄组织中进行了QRT-PCR，包括根，幼杆子，子叶，茎，叶，花和水果。表达gydF4y2BaSLGT11gydF4y2Ba在花中高度富集（图。gydF4y2Ba3.gydF4y2Ba一种）。然后在开花的不同部位提取RNA，在花序中为QRT-PCR，我们发现gydF4y2BaSLGT11gydF4y2Ba主要在雄蕊中表达，说明gydF4y2BaSLGT11gydF4y2Ba可能对雄蕊的发育很重要(图。gydF4y2Ba3.gydF4y2Bab）。此外，我们分析了时间表达趋势gydF4y2BaSLGT11gydF4y2Ba在花发育过程中。存在显示gydF4y2BaSLGT11gydF4y2Ba表达是时间特异性的，在开花前6天至2天的高表达水平（在第12-18期）（图。gydF4y2Ba3.gydF4y2BaC）。gydF4y2Ba

此外，我们构建了一个由此驱动的GUS记者gydF4y2BaSLGT11gydF4y2Ba启动子并将其转化为WT番茄（图。gydF4y2Ba3.gydF4y2Bad）。Gus染色表明gydF4y2BaSLGT11gydF4y2Ba在整个鲜花的整个早期表达，表达在后期阶段的雄蕊和卡皮尔更具体地变得更具体gydF4y2Ba（gydF4y2Ba如图。gydF4y2Ba3.gydF4y2BaegydF4y2Ba）gydF4y2Ba．表达模式gydF4y2BaSLGT11gydF4y2Ba在内部两个花螺纹意味着它可能参与了番茄雄蕊和卡皮尔发育的调节。gydF4y2Ba

雄蕊缺陷在早期就出现了gydF4y2Ba

研究SlGT11对不同花发育阶段雄蕊和心皮的影响[gydF4y2Ba41.gydF4y2Ba]，我们使用扫描电子显微镜（SEM）来可视化WT的花卉发育，gydF4y2BaSLF.gydF4y2Ba和gydF4y2BaSLGT11gydF4y2BaRNAi线6（图。gydF4y2Ba4gydF4y2BaA-O）。早期阶段（在第3阶段之前，当萼片原基和瓣Primordia被开始时）的花卉发育gydF4y2BaSLF.gydF4y2Ba和gydF4y2BaSLGT11gydF4y2BaRNAI线6似乎与WT的线相似（图。gydF4y2Ba4gydF4y2Baf)。在第五阶段，WT和gydF4y2BaSLF.gydF4y2Ba或者gydF4y2BaSLGT11gydF4y2BaRNAI线6变得更加突出。在WT中，分别在第三和第四螺纹中引发六个雄蕊原基和具有四个局部的一个Carpel原始（图。gydF4y2Ba4gydF4y2BaG）。相比之下，第三和第四个花器官原奖gydF4y2BaSLF.gydF4y2Ba和gydF4y2BaSLGT11gydF4y2BaRNAi线6无序启动(图。gydF4y2Ba4gydF4y2Bah、 j）。花器官同一性的缺陷在不同时期变得更加严重gydF4y2BaSLF.gydF4y2Ba和gydF4y2BaSLGT11gydF4y2BaRNAI线6处于6和9的阶段gydF4y2Ba（gydF4y2Ba如图。gydF4y2Ba4gydF4y2BaJ，M.gydF4y2Ba）gydF4y2Ba．在突变体中，大多数雄蕊转化为类似肉斑状结构，并且在花的中心区域产生一些异位分泌物gydF4y2Ba（gydF4y2Ba如图。gydF4y2Ba4gydF4y2Bak，l，n和ogydF4y2Ba）gydF4y2Ba. 结合时空表达，我们得出结论gydF4y2BaSLGT11gydF4y2Ba在花卉器官的早期发展中起着重要作用。gydF4y2Ba

花卉发育基因的表达gydF4y2BaSLF.gydF4y2Ba突变体gydF4y2Ba

由于雄蕊和心皮的缺陷发生在早期阶段，因此比较了先前据报道的BCE基因的表达，以影响WT和阶段1-6阶段的花蕾中的雄蕊和Carpel身份gydF4y2BaSLF.gydF4y2Ba［gydF4y2Ba41.gydF4y2Ba]. 与表型一致，BCE基因在野生型和野生型之间表现出不同的表达模式gydF4y2BaSLF.gydF4y2Ba突变体。B类基因gydF4y2BaTap3.gydF4y2Ba，gydF4y2BaTPI.gydF4y2Ba和gydF4y2BaTPIB.gydF4y2Ba，C类基因gydF4y2Ba标签1gydF4y2Ba，gydF4y2Batagl1.gydF4y2Ba和E类基因gydF4y2BaTM29gydF4y2Ba，都是显着下调的gydF4y2BaSLF.gydF4y2Ba．但是，B类基因的表达水平gydF4y2BaTM6.gydF4y2Ba和e类基因gydF4y2BaTM5gydF4y2Ba没有显着影响gydF4y2BaSLF.gydF4y2Ba在花发育过程中(图。gydF4y2Ba5gydF4y2Ba一种）。gydF4y2Ba

我们接下来分析了一些涉及花卉公司标识和花卉公司终止的一些监管机构的表达水平。由于在花卉发育的后期阶段重复出现异位花卉分生物（图。gydF4y2Ba1gydF4y2Bag），我们选择了一系列的花卉发展基因，包括gydF4y2Baslwus.gydF4y2Ba，gydF4y2BaSLKNU.gydF4y2Ba，gydF4y2Baslclv3.gydF4y2Ba，gydF4y2Baslclv1.gydF4y2Ba，gydF4y2BaSLCLV2.gydF4y2Ba，gydF4y2BaFALSIFLORAgydF4y2Ba（gydF4y2BaF AgydF4y2Ba），gydF4y2BaSliul1gydF4y2Ba和gydF4y2Baslrbl样gydF4y2Ba用于在后期花级（阶段20）的转录分析。gydF4y2BaF AgydF4y2Ba和sgydF4y2Balwus.gydF4y2Ba被上调gydF4y2BaSLF.gydF4y2Ba， 尽管gydF4y2BaSLKNU.gydF4y2Ba，gydF4y2Baslclv3.gydF4y2Ba，gydF4y2Baslclv1.gydF4y2Ba和gydF4y2BaSliul1gydF4y2Ba似乎被下调了gydF4y2BaSLF.gydF4y2Ba花（图。gydF4y2Ba5gydF4y2Bab，c）。这些结果与花卉公司终止缺陷一致gydF4y2BaSLF.gydF4y2Ba突变体。gydF4y2Ba

高温抑制了gydF4y2BaSLGT11gydF4y2Ba和gydF4y2BaTM29gydF4y2Ba

在夏季温度高于标准的温室栽培中，我们发现表型gydF4y2BaSLF.gydF4y2Ba雄蕊不明显，花分生组织异位的缺陷花明显增多。温度在花的发育过程中起着重要的作用[gydF4y2Ba42.gydF4y2Ba，我们测试了是否gydF4y2BaSLGT11gydF4y2Ba温度也会影响功能。为此，我们培育了WTgydF4y2BaSLF.gydF4y2Ba突变体种子在25°C下培养4周，在加热培养箱(白天37°C /夜间28°C)中培养20天。这种花是由gydF4y2BaSLF.gydF4y2Ba在较高温度下生长的突变体具有较多的心皮状结构，第三轮未见雄蕊状结构。gydF4y2Ba6gydF4y2Bad）。另外，通过形成具有萼片结构的绿色花瓣，瓣似乎部分地捕获萼片同一性（图。gydF4y2Ba6gydF4y2Baf).此外，我们发现成熟花的中心产生了芽/花的分生组织(图8)。gydF4y2Ba6gydF4y2Bad).尽管花叶中也产生了钟状雄蕊和异位芽/花分生组织gydF4y2BaSLF.gydF4y2Ba较低温度下的花朵（25°C白天/ 22°C夜晚），其出现频率在较高温度下显着更高。gydF4y2Ba

进一步剖析高温对温度的影响gydF4y2BaSLGT11gydF4y2Ba，我们进行了QRT-PCR以分析潜在的转录变化。WT和早期阶段的花蕾gydF4y2BaSLF.gydF4y2Ba收集在较高温度下生长的突变体用于RNA提取和QRT-PCR。我们的结果表明gydF4y2BaSLGT11gydF4y2Ba高温抑制了表达（图。gydF4y2Ba6gydF4y2Bag)高温处理3 h、7 h和24 h后检测BCE基因的表达水平。我们的结果显示E类基因gydF4y2BaTM29gydF4y2Ba通过高温进一步显着下调gydF4y2BaSLF.gydF4y2Ba突变体（图。gydF4y2Ba6gydF4y2Bah, i).酵母单杂交试验未能检测到SlGT11直接结合到gydF4y2BaTM29gydF4y2Ba启动子区域。所有的结果(图gydF4y2Ba5gydF4y2Ba，gydF4y2Ba如图。gydF4y2Ba6gydF4y2Bag-i）表示SLGT11间接激活gydF4y2BaTM29gydF4y2Ba转录，而高温进一步抑制了转录gydF4y2BaSLGT11gydF4y2Ba和gydF4y2BaTM29gydF4y2Ba两者都在wt和gydF4y2BaSLF.gydF4y2Ba．gydF4y2Ba

经典ABC模型先前在模型植物中建立gydF4y2Ba拟南芥gydF4y2Ba和gydF4y2BaAntirrhinum Majus.gydF4y2Ba［gydF4y2Ba1gydF4y2Ba]．在一流的突变体中，花朵有Carpels-stamens-stamens-carpels（从最外面到最内部的螺旋），而B级突变体具有萼片 - 萼片 - 心皮 - 鲜花，C级突变体具有萼片 - 花瓣 -​​ 花瓣- 开花。e-class突变体具有与类似萼片的所有器官的花[gydF4y2Ba1gydF4y2Ba，gydF4y2Ba43.gydF4y2Ba]．在番茄中，B/C/E类基因的功能似乎比B/C/E类基因更为复杂gydF4y2Ba拟南芥gydF4y2Ba和gydF4y2Ba金鱼草属植物gydF4y2Ba．番茄中有四种同源B类基因：gydF4y2BaTap3.gydF4y2Ba，gydF4y2BaTM6.gydF4y2Ba，gydF4y2BaTPI.gydF4y2Ba和gydF4y2BaTPIB.gydF4y2Ba．尽管观察到类似的表型gydF4y2BaTap3.gydF4y2Ba和gydF4y2BaTPIB.gydF4y2Ba突变，突变gydF4y2BaTM6.gydF4y2Ba或者gydF4y2BaTPI.gydF4y2Ba只有导致雄蕊转化为插管，而不会影响花瓣和卡片[gydF4y2Ba6gydF4y2Ba，gydF4y2Ba7gydF4y2Ba，gydF4y2Ba13.gydF4y2Ba，gydF4y2Ba44.gydF4y2Ba，gydF4y2Ba45.gydF4y2Ba]．两个番茄C类基因Tag1和Tagl1在花卉发展中具有冗余和不同的功能[gydF4y2Ba9gydF4y2Ba]．表达TAG1反义RNA的转基因植物显示出第三螺纹雄蕊的骨质转化转化为Petaloid器官，并在第四轮中出现不确定的花卉分类[gydF4y2Ba8gydF4y2Ba]．然而，Tagl1主要指定雄蕊和花萼开发，并控制水果开发和成熟[gydF4y2Ba46.gydF4y2Ba]．e类基因gydF4y2BaTM29gydF4y2Ba共抑制可导致内三轮器官形态发生改变的异常花的表达下调。在这三轮中，花瓣和雄蕊部分转化为萼片结构，带有叶子的异位芽和次生花从果实中出现[gydF4y2Ba37.gydF4y2Ba]．在本研究中，我们鉴定了一个隐性突变体gydF4y2BaSLGT11gydF4y2Ba其表型类似于一些先前表征的突变体的基因，具有功能障碍B / C / E类基因。carpelloid stamengydF4y2BaSLF.gydF4y2Ba表明SlGT11是B型基因在第三轮的功能所必需的。花分生组织终止失败和花反转的发生gydF4y2BaSLF.gydF4y2Ba表明C型基因的功能部分需要第四轮的SLGT11活性。此外，我们发现缺陷gydF4y2BaSLF.gydF4y2Ba在较高温度下基本上增强，具有转化为萼片的花瓣，第四轮的异位射击/花卉分生的频率增加。这表明SLGT11在三个内部花螺纹的发展方面至关重要。gydF4y2Ba

SLGT11gydF4y2Ba在花卉发育的早期阶段广泛表达，但其表达逐渐被集中在雄蕊和卵巢的血管束中。我们推测这一点gydF4y2BaSLGT11gydF4y2Ba发挥作用的作用在开入的花器器官的每个螺纹，尤其是雄蕊的开始。据报道，影响雄蕊发育的BCE基因的表达与gydF4y2BaSLGT11gydF4y2Ba表达域。B类基因包括gydF4y2BaTap3.gydF4y2Ba，gydF4y2BaTM6.gydF4y2Ba和gydF4y2BaTPI.gydF4y2Ba以前都显示在雄蕊位置有表达[gydF4y2Ba6gydF4y2Ba，gydF4y2Ba7gydF4y2Ba]．C基因gydF4y2Ba标签1gydF4y2Ba在番茄的花卉发育期间也主要在雄蕊和心皮中表达[gydF4y2Ba8gydF4y2Ba]．与B类和C基因相比，表达gydF4y2BaTM29gydF4y2Ba在早期阶段更广泛，包括血管束。但在花卉发展的后期阶段，gydF4y2BaTM29gydF4y2Ba表达主要集中在雄蕊和心皮中，与表达域重叠gydF4y2BaSLGT11gydF4y2Ba［gydF4y2Ba37.gydF4y2Ba]．此外,gydF4y2BaSLGT11gydF4y2Ba基因也表达血管束，其可能是异常茎的起源。与wt相比，表达了gydF4y2BaTap3.gydF4y2Ba，gydF4y2BaTPI.gydF4y2Ba，gydF4y2BaTPIB.gydF4y2Ba和gydF4y2BaTM29gydF4y2Ba在gydF4y2BaSLF.gydF4y2Ba都被下调了，暗示gydF4y2BaSLGT11gydF4y2Ba可调控BCE基因表达，促进雄蕊发育。因此,gydF4y2BaSLGT11gydF4y2Ba可能是除ABC模式基因外调控花器官发育的调节因子之一。gydF4y2Ba

通过复杂的监管网络严格控制花卉发展，以确保植物的成功繁殖。在自然条件下，从营养生殖增长的过渡是不可逆转的，因此在花卉发展期间可以实现正确的组织图案化[gydF4y2Ba31.gydF4y2Ba]．gydF4y2BaSLF.gydF4y2Ba突变体的花发育逆转为营养器官，表明花的分生组织终止成为缺陷。一些先前有特征的突变体证明了这一点，包括gydF4y2BaTap3.gydF4y2Ba，gydF4y2BaTPIB.gydF4y2Ba和gydF4y2BaTM6.gydF4y2Ba，这种表型逆转不一定与融合的雄蕊和心皮缺陷有关，尽管[gydF4y2Ba6gydF4y2Ba，gydF4y2Ba7gydF4y2Ba]．在gydF4y2Ba拟南芥gydF4y2Ba，弱等位基因的心皮gydF4y2Baag-4gydF4y2Ba部分转化为萼片而雄蕊和心皮的等位基因强gydF4y2Baag-6gydF4y2Ba完全转化为花瓣和萼片[gydF4y2Ba5gydF4y2Ba，gydF4y2Ba20.gydF4y2Ba，gydF4y2Ba47.gydF4y2Ba]．尽管轮流中形成了新的花朵gydF4y2Baag-2gydF4y2Ba鲜花，可以看到没有叶子，表明这种缺陷只代表了花卉绩论的异常终止[gydF4y2Ba1gydF4y2Ba]．但在短日上生长，gydF4y2Baag-1gydF4y2Ba突变体展示了花卉公司恢复恢复营养发展gydF4y2Ba拟南芥gydF4y2Ba．类似的表型在gydF4y2Ba拟南芥gydF4y2Ba突变体gydF4y2Balfy-6型gydF4y2Ba［gydF4y2Ba32.gydF4y2Ba]. 直接同源基因gydF4y2BaAG)gydF4y2Ba在番茄中gydF4y2Ba标签1gydF4y2Ba．符合保守功能gydF4y2BaAG)gydF4y2Ba，gydF4y2Ba标签1gydF4y2Ba将第三螺纹雄蕊的造型转化为Petaloid器官，并用不确定的花卉商品替换第四螺纹心脏病，类似于gydF4y2Baag-2gydF4y2Ba［gydF4y2Ba8gydF4y2Ba]．表达转基因植物gydF4y2BaTM29gydF4y2Ba反义RNA在水果中部分开发的叶片和次要花卉产生异位芽[gydF4y2Ba37.gydF4y2Ba]．在这里，我们发现依次抑制花卉营业，并且将花卉发育逆转到植物子中gydF4y2BaSLF.gydF4y2Ba这表明SlGT11的活性对于这些先前报道的基因的功能是必需的。gydF4y2Ba

在gydF4y2Ba拟南芥gydF4y2Ba，干细胞维持在花卉发展的第6阶段丢失，这使得花卉测定[gydF4y2Ba48.gydF4y2Ba]．在wt花，gydF4y2Ba沃斯gydF4y2BamRNA在这个阶段无法察觉，但在gydF4y2Baag)gydF4y2Ba突变体，gydF4y2Ba沃斯gydF4y2Ba在FM中连续表达，导致FM终止中断[gydF4y2Ba48.gydF4y2Ba]．在gydF4y2BaSLF.gydF4y2Ba，gydF4y2Baslwus.gydF4y2Ba在番茄花卉发展的后期没有被压抑。直接或间接压缩机gydF4y2Ba沃斯gydF4y2Ba,如gydF4y2BaSLKNU，TAG1，SLCLVSgydF4y2Ba，gydF4y2Basliult1.gydF4y2Ba，都是下调的gydF4y2BaSLF.gydF4y2Ba．然而，花分生组织识别基因gydF4y2BaF AgydF4y2Ba上调gydF4y2BaSLF，gydF4y2Ba这与花卉公司终止的缺陷一致gydF4y2BaSLF.gydF4y2Ba．gydF4y2Ba

有趣的是，gydF4y2BaAGLFgydF4y2Ba，同源基因gydF4y2BaSLGT11gydF4y2Ba在gydF4y2BaMedicago truncatulagydF4y2Ba，似乎只作为C型基因发挥作用[gydF4y2Ba16.gydF4y2Ba]．尽管存在类似的表达模式gydF4y2BaAGLFgydF4y2Ba和gydF4y2BaSLGT11gydF4y2Ba在内部两个螺纹中，各自突变体中雄蕊和心皮的不同发育缺陷表明该基因可能具有不同的功能gydF4y2BaMedicago.gydF4y2Ba和番茄。敲除突变体gydF4y2BaSLGT11gydF4y2Ba同源基因gydF4y2Ba拟南芥gydF4y2Ba（gydF4y2BaAT5G51800.gydF4y2Ba)花器官鉴定无缺陷[gydF4y2Ba16.gydF4y2Ba，gydF4y2Ba39.gydF4y2Ba]，表明这一点gydF4y2BaSLGT11gydF4y2Ba功能可能已经进化地分散在不同的物种中。gydF4y2Ba

总之，我们发现丢失功能gydF4y2BaSLGT11gydF4y2Ba在第2轮高温下形成萼片状的花瓣，第3轮形成carploloid雄蕊，第4轮形成茎状、叶状和花状的异位结构。这些表型表明gydF4y2BaSLGT11gydF4y2Ba具有复杂的功能，类似于花器官规范中的B / C / E级基因。时尚表达分析表明gydF4y2BaSLGT11gydF4y2Ba在花发育的早期阶段都有表达，而gydF4y2BaSLGT11gydF4y2Ba在以后的阶段，表达更具体地对雄蕊和心皮的原始。我们的结果在一起表明gydF4y2BaSLGT11gydF4y2Ba花式器官图案化的功能与番茄花卉测定维护。gydF4y2Ba

通过该研究获得的结果表明，一种新的番茄三螺纹基因的破坏gydF4y2BaSLGT11gydF4y2Ba导致在花卉发育期间丧失花器官身份和花卉对营养发展的恢复。一起与时空表达模式gydF4y2BaSLGT11gydF4y2Ba，我们的结果表明，SLGT11对生殖器官发展至关重要，但SLGT11同源基因的功能进化地分歧gydF4y2Ba拟南芥gydF4y2Ba和gydF4y2BaMedicago.gydF4y2Ba. 本研究为三螺旋基因SlGT11在花发育中的作用提供了新的认识。gydF4y2Ba

植物材料和生长条件gydF4y2Ba

本研究中使用的所有植物均为番茄(gydF4y2BaSolanum Lycopersicum L.gydF4y2Ba）加入微米背景。种子gydF4y2Bastamenless像花gydF4y2Ba（gydF4y2BaSLF.gydF4y2Ba）从番茄突变体归档中获得突变体（Tomjpg2637-1）（gydF4y2Bahttp://tomatoma.nbrp.jp/gydF4y2Ba）.自从此以来gydF4y2BaSLF.gydF4y2Ba突变体是部分无菌性，来自杂合植物的种子用于产生纯合体。gydF4y2Ba

种子在28°C、完全黑暗的湿润滤纸上预发芽。植株在相对湿度为60%的温室中长日照条件下生长(光照16小时/黑暗8小时)。白天和夜间温度分别为26°C和22°C。所有的植物都定期浇水和施肥。gydF4y2Ba

表型表征gydF4y2Ba

为了分析花器官缺陷，我们统计了每株番茄上至少20个花的花器官数量。为了分析每朵花中雄蕊的数量，我们采集了开花期的花进行定量分析。为了分析异位花分生组织，我们在花开花期前取去萼片和花瓣。解剖后立即用尼康SMZ18立体显微镜对异位花分生组织进行形态学成像。gydF4y2Ba

组织学分析gydF4y2Ba

用尼康SMZ18型立体显微镜对新鲜花器官进行解剖和观察，以确定其形态和发育特征。甲苯胺蓝染色如前所述[gydF4y2Ba49.gydF4y2Ba]．短暂的六周龄WT和六个月的花蕾gydF4y2BaSLF.gydF4y2Ba在真空条件下在Faa（3.7％甲醛，5％甲酸，50％乙醇）的真空条件下在FAA（3.7％甲醛，5％乙酸，50％乙醇）进行30分钟。将这些样品脱水在分级乙醇和叔丁醇系列中，然后嵌入含有50％叔丁醇的石蜡溶液中4小时。将渗透的样品置于纯石蜡（Sigma-Aldrich）中含有过夜。gydF4y2Ba

用LeICA RM2255显微塔切割切片（10μm厚），并通过脱蜡剂进一步除去石蜡。将组织部分小心地在纯水中洗涤，然后在0.25％甲苯胺蓝o（Sigma-Aldrich，U.S.A）中染色1分钟。所有显微照片都用尼康SMZ18立体显微镜拍摄。gydF4y2Ba

扫描电子显微镜gydF4y2Ba

用扫描电镜(SEM)对早期花进行了分析:在立体显微镜下将萼片和花瓣从新鲜的花器官中仔细分离;用TM3030 PLUS扫描电镜在量子250 FEG扫描电镜下，在5 kV加速电压下观察这些样品。gydF4y2Ba

亚细胞本地化gydF4y2Ba

35Spro：SLGT11-GFP和相应的空载体phellsgate 8（35spro：GFP）转化为GV3101的土壤杆菌并注入gydF4y2Ba尼古利亚娜·宾夕法尼亚州gydF4y2Ba叶子。将叶片浸润的植株置于25℃黑暗中培养24 h，再置于光照下培养12 h，用共聚焦显微镜观察GFP信号(LSM 880，德国Carl Zeiss)。引物列在gydF4y2BaS1级gydF4y2Ba桌子。gydF4y2Ba

块状分离分析(BSA)gydF4y2Ba

Chang等人进行了批量分离分析[gydF4y2Ba50.gydF4y2Ba]．的gydF4y2BaSLF.gydF4y2Ba纯合植物用作女性父母并横向于WT。然后将F1植物自拍以产生F2映射群。对于BSA-SEQ，我们从28中提取了基因组DNAgydF4y2BaSLF.gydF4y2BaFgydF4y2Ba_2gydF4y2Ba使用CTAB方法映射群体[gydF4y2Ba51.gydF4y2Ba]．在混合之前检查所有DNA质量和浓度，以构建两个泡沫（gydF4y2BaSLF.gydF4y2Ba散装和wt批量）。的gydF4y2BaSLF.gydF4y2Ba通过HiseqXTEN-PE150（Novogene）对散装和WT批量进行测序为28×和30倍番茄基因组的覆盖率。修剪序列映射到番茄参考基因组（Heinz 1706品种）上，过滤突变变体。对池中的等位基因变体频率分析导致识别100％频率的因果突变gydF4y2BaSLF.gydF4y2Ba块。进一步研究了具有预期1的预期等位基因频率的基因，我们对所确定的候选基因进行转基因验证。克隆并测序候选基因以验证突变。引物列在gydF4y2BaS1级gydF4y2Ba桌子。gydF4y2Ba

SLGT11 RNAi基因构建体gydF4y2Ba

为了产生SLGT11 RNA干扰转基因植物，通过Sol基因组学网络Vigs工具选择PKC激酶样域的3'末端附近的253bp序列。gydF4y2Bahttps://vigs.solgenomics.net/gydF4y2Ba）.将扩增的cDNA克隆到进入载体pDONR221中，然后进一步重组成二元载体PK7GWIWG2（II）。将二元质粒转化到Agrobacterium C58菌株中以产生SLGT11 RNAi转基因系。gydF4y2Ba

植物遗传转化gydF4y2Ba

根据Brooks等人进行农杆菌介导的番茄的转化。［gydF4y2Ba52.gydF4y2Ba]．总之，将6- 8 d老苗的子叶片段预培养1d，然后接种含有RNAi结构的农杆菌菌株C58。2d共培养后，将子叶片段转移到含卡那霉素的选择性再生培养基中。每15天进行一次传代培养，直到这些幼苗产生三片真叶。这些幼苗被转移到含有卡那霉素的选择性生根培养基中。只有生根良好的植物被转移到温室。gydF4y2Ba

系统发育和序列分析gydF4y2Ba

从NCBI数据库获得番茄和其他物种中的SLGT11家族成员的序列（gydF4y2Bahttps://blast.ncbi.nlm.nih.gov/blast.cgi.gydF4y2Ba），并使用Mega5中的Clustalw功能对齐。使用Mega5中的最大似然方法构建具有1000释放复制的蛋白质的系统发育树。gydF4y2Ba

成像，显微镜和GUS染色gydF4y2Ba

为了产生PSLGT11 :: GUS构建体，通过输注克隆方法将3kB包含SLGT11上游区域的基因组序列克隆到PGWB432二元载体中。在寒冷的90％丙酮中固定后，在37℃下用GUS溶液染色，在37°C中染色，在37°C下染色。将这些样品在溶液中脱水（乙醇：乙酸冰川，以比例为4：1体积）约6小时[gydF4y2Ba53.gydF4y2Ba]．用不同浓度的乙醇(40%乙醇15 min、20%乙醇15 min、10%乙醇15 min)对样品进行清洗。脱水后的样品用5%琼脂包埋，用德国徕卡振动切片机切片。使用尼康SMZ18立体显微镜观察SlGT11的表达谱[gydF4y2Ba54.gydF4y2Ba]．gydF4y2Ba

定量实时PCR分析gydF4y2Ba

为进行实时定量PCR (qRT-PCR)，选取生长条件相似的4周龄番茄植株进行组织采集，包括根、下胚轴、子叶、茎、叶、花、果实、不同花器官和不同发育阶段的花[gydF4y2Ba41.gydF4y2Ba]．使用Eastep超级RNA提取试剂盒（上海Promega）分离出总RNA。随后，使用Hiscrip II第1链CDNA合成试剂盒（+ GDNA刮水器，Vazyme）来合成第一链cDNA。Chamq Universal Sybr QPCR主链套件（Vazyme）用于在7300实时PCR系统中进行QRT-PCR反应（CFX Connect，Bio-rad）。使用肌动蛋白基因作为组成型对照。使用2计算相对基因表达gydF4y2Ba^{inu - ΔΔct.gydF4y2Ba}方法 [gydF4y2Ba50.gydF4y2Ba]．所有分析均在三个生物学重复和两种技术复制中进行。QRT-PCR的所有引物序列可以在表中找到gydF4y2BaS1级gydF4y2Ba．gydF4y2Ba

酵母 - 单杂交测定gydF4y2Ba

使用手册中描述的Matchmaker EYG48酵母单杂交系统（Clontech）进行酵母单杂交分析。将效应蛋白SlGT11的编码序列克隆到PJG4-5载体中，将B/C/E类基因的启动子序列克隆到报告载体Placzy中。两种载体均转化到EYG48酵母菌株中。在不含尿嘧啶和色氨酸的培养基上培养和筛选二倍体酵母细胞。为了检测蛋白质-启动子相互作用，克隆在两种不含尿嘧啶和色氨酸，但含x-半乳糖的脱落培养基上生长2天，温度为30℃ 摄氏度。以空载体作为对照。所有用于克隆的引物序列可在表中找到gydF4y2BaS1级gydF4y2Ba．gydF4y2Ba

酵母 - 双杂化测定gydF4y2Ba

根据手册使用麦克风金酵母双杂交系统（Clontech）进行酵母中的蛋白质相互作用测定。将诱饵蛋白的SLGT11编码序列克隆到PGBKT7载体中，并且克隆到PGADT7载体中的BCE类基因。然后将载体转化到Y2HGold酵母菌株中。选择二倍体酵母细胞并在没有亮氨酸和色氨酸的辍学培养基上生长。为了测定蛋白质 - 蛋白质相互作用，在30℃下在没有亮氨酸，色氨酸，组氨酸和腺嘌呤的四重滴管介质上生长克隆。用于克隆的所有引物序列可以在表中找到gydF4y2BaS1级gydF4y2Ba．gydF4y2Ba

本研究期间生成或分析的所有数据都包含在本发布的文章及其补充信息文件中。在当前研究期间使用和分析的数据集可从合理的请求中获得相应的作者。gydF4y2Ba

我们感谢Bing Hua的批判阅读这份手稿。我们感谢番茄突变体归档供应番茄种子gydF4y2BaSLF.gydF4y2Ba变种人。gydF4y2Ba

基金资助:国家重点研发计划项目(no . 2018YFD1000800);国家自然科学基金项目(no . 31722006);福建省重点研发计划项目(no . 2018NZ0002)。资助机构在研究的设计、收集、分析和解释数据以及撰写手稿中没有扮演任何角色。gydF4y2Ba

隶属关系gydF4y2Ba

1. 艺术园林园艺学院，福建省应用植物系统生物学，福建农业和林业大学福建省重点实验室，福州gydF4y2Ba

   LiLing Yang，Shilian Qi，Arfa Touqeer，海阳李和双武gydF4y2Ba

2. 农业科技北京农业大学农业大学农作物分子育种植物作物增长和发展监管重点实验室，中国农业大学北京，北京gydF4y2Ba

   小榄张晓峰刘gydF4y2Ba

贡献gydF4y2Ba

S.W.，S.Q.和X. L设计了研究;L.Y.进行实验;L.Y.，S.Q.，H.L.和S.W.分析了数据;L.Y.，A.T.，X. Z，X. L和S.W.写了这篇论文。所有作者都读过并批准了稿件。gydF4y2Ba

相应的作者gydF4y2Ba

对应到gydF4y2Ba小榄张gydF4y2Ba或者gydF4y2Ba晓峰刘gydF4y2Ba或者gydF4y2Ba双武gydF4y2Ba．gydF4y2Ba

伦理批准并同意参与gydF4y2Ba

不适用。gydF4y2Ba

同意出版gydF4y2Ba

不适用。gydF4y2Ba

相互竞争的利益gydF4y2Ba

作者声明没有竞争的财务利益。gydF4y2Ba

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