方法的组合证明了奇迹浆果中的种子储存行为Synsepalum dulcificum.(舒马赫。et Thonn)。丹尼尔

背景

关于种子储存行为的知识对于植物遗传资源的规划策略特别是在经济上有前途但濒危物种时至关重要Synsepalum dulcificum.，被视为顽抗种子物种，尽管缺乏声音证据。在这项研究中，我们将基于关键水分含量和储存环境分析的实验方法以及种子涂层比干料（SCR-SM）模型阐明了种类的种子储存行为。分析了脱落的种子水分含量，分析了脱水和冷储存对种子活力，发芽和随后的幼苗活力的影响。也确定了Dessication-senstery [P（D-S）]的概率。

结果

我们的发现表明美国果脱落时种子含水量为36.60%，活力接近100%。含水量低于20%的种子脱水会导致活力完全丧失，而低温贮藏(在10°C或4°C下将缩短保质期至最长7天。更重要的是,美国果0°C贮藏是非常有害的，无论贮藏多长时间，种子的活力都将完全丧失。只有在25°C的条件下，才能将保质期延长到28天。贮藏28 d时，其活力极低，几乎不萌发。其干燥敏感性P(D-S)的概率很大程度上大于0.5。种子脱水和贮藏环境对种子萌发率和幼苗活力有重要影响。脱水可改善幼苗生长性能，低温贮藏则抑制幼苗生长。

结论

综上所述，这些发现首次证明了反抗的存在美国果并为实际处理种子和设计可持续保护措施提供实际信息，为该物种未来的繁殖计划提供足够的信息。

种子储存行为的知识对于植物遗传资源的保护策略规划至关重要[1]．根据植物种子的耐干燥程度和耐储藏温度，植物种类可分为三大类:正种子种、中间种子种和顽强种子种[2那3.]．正统种子可能耐受严重的干燥（低于0.05g g⁻¹含水量），可以储存在零零温度下而不会损坏[4.]．它们有一个很大的水合窗口[5.]．难以储存的种子被分类为中间和顽皮类型。顽皮的种子对干燥非常敏感[6.]，并不能在干燥至相对较低的水分含量时存活[2]．中间物种对低水分含量和低储存温度敏感，与一个非常窄的水合窗口相结合[7.那8.]．由于抗性物种的高敏感性，它们的种子只能存活很短的一段时间，并且不能进行中长期储存[3.]．顽强和中间种子物种的保护被认为是种子科学家面临的最具挑战性的问题之一，减少迁地选择[9.]．在二十一世纪的特征在于，在定义传播和保护策略，需要有关种子储存行为所需的准确信息。

众所周知，世界上有超过25%的植物种类产生了抗性物种[9.)以及世界上超过8%的开花植物产生难以储存的种子[10其中许多展示了巨大的经济和食物价值（例如Artocarpus heterophyllus.Lamk。Coffeaspp。,Theobroma可可l .)。长期以来，将植物分类为三种种子贮藏行为(SSB)中的一种或另一种一直是一个挑战。事实上，第一份“顽固种子种”名单被修改了两次，第一次从73种缩短到68种，第二次从68种缩短到49种[11那12]．后来，霍夫曼和施泰纳[13]提出了另一份186个不受欢迎物种的名单，而不包括前一份名单中的19个物种(例如。Elaeis Guineensis.l .,Azadirachta indical .)。之后，17个物种(例如。Flacourtia籼（卷发）merr, Fagraea桂花最初被Hong等人归类为正统种子[14)被法恩斯沃斯重新归类为“顽固种子”[15]．尽管如此，过去二十年种子科学领域的进步已经导致使用更准确但简化的方法，甚至组合方法来克服确定种子储存行为的挑战。例如，Oliver等人[16]使用代谢组合方法突出显示两个姐妹种类种子储存行为的差异（Sporobolus锥体P.Beauv。和S. Stapfianus.而Delahaie等人[17]使用蛋白质组学方法来说明种子储存行为的差异Castanospermum南国答:Cunn。& C. Fraser和Medicago truncuntalaGaertn。类似地，Pritchard等人[18和Daws等人[19]分别提出了100种试验模型和种皮比-种子干质量(SCR-SM)模型，用于快速评估种子的贮藏行为，特别是木质种子。在单边储备基金的分配中，一个持续的趋势是将几种方法结合起来，从而得出更可靠的结论[20.那21)，似乎与近31.1万种植物的快速可靠研究有关，这些植物仍然需要种子贮藏生理方面的信息[18]．

在……的情况下Synsepalum dulcificum.(舒马赫。et Thonn)。丹尼尔(syn:Richardella德国特拉(舒马赫et Thonn。)Baehni]是一种缺乏文献记载的物种，一些作者认为这种物种是顽强的种子，可能是因为种子在风干后很快失去活力[22那23]．然而，洪和埃利斯[3.]表明，快速的种子活力损失不特异于顽殖种子。例如，在属中柳树的种子在露天储藏2天内失去活力[24]．

Synsepalum dulcificum.是一种具有社会经济价值和食品、医药和化妆品行业巨大潜力的非洲原生灌木。该品种因其“奇迹果仁”而享誉世界，这是一种具有增甜活性的糖蛋白，是酸性饮料中合成糖的替代品[25]．Achigan-Dako等人提供了该物种利用和潜力的详细信息。[26]．随着物种使用的越来越意识，减少了世界上糖尿病，基本知识就会成为定义作物改进方案至关重要。为此，适当处理种质和种子批次将促进物种遗传资源的管理。虽然物种属于果实，一种植物家庭，在顽醋栗种类比例的比例中排名第三（在家庭中的64.5％的样品）[27]，该属植物的种子贮藏行为Synsepalum.特别是在美国果从未妥善阐明。此外，上述结论仅基于全球凝固性物种的2.4％。此外，洪和埃利斯[3.]疑似中间种植物种在家庭中表明需要进行特异性特异性调查，以便具有明确的行为划界。此外，种子信息数据库[28]表示美国果作为“可能的顽固性”，呼吁有必要进行进一步的调查，以确定该物种的种子储存行为。

因此，本文的目的是使用一个证明驱动的方法来澄清种子储存行为Synsepalum dulcificum.．我们假设i)Synsepalum dulcificum.种子真正顽固，II）脱水和储存降低种子活力和幼苗生长美国果．我们结合实验和理论方法分析脱水和贮藏如何影响种子活力和随后的幼苗生长。

种子萌发与果实颜色的关系Synsepalum dulcificum.

不同颜色的果实，其发芽率差别很大(P.< 0.001)(图1A).黄色和全红色果实的发芽率较高，而绿色果实的发芽率较低。同样，黄色和红色果实萌发的时间比绿色果实(P.< 0.01)(图1b）而且，总体而言，完全红色的水果比任何其他水果更快地发芽（P.< 0.001)(图1C)绿色果实的萌发率没有达到50%，而黄色果实和红色果实的萌发率则在相对相似的时间范围内达到50% (P.>(图0.05)。1d）。对于所有评估的参数，在完全红色的水果中不断观察到最佳性能。这些表明红色果实美国果确保足够成熟的种子来解开物种中的种子储存行为。对于随后的实验，我们专门从完全红色的水果中使用种子。

种子储存行为Synsepalum dulcificum.

新鲜的100粒种子美国果为19.44±0.18 g。脱落时种子含水率(m.c.)为36.6±0.79%。

脱落时，种子活力为99±1%。脱水显著降低了存活率(P. <  0.0001). It decreased from 99% in fresh seeds (36.6% m.c.) to 49% (20% m.c.) and 0% below 10% moisture content (Fig.2，附加文件1）.同样，脱水对发芽率也有负面影响(P.< 0.0001)(图2b）。在种子脱水至9.5和5.1％甲基中未观察到发芽，而当种子水分含量减少一半时，萌发百分比减少了近似的近似了（图。2b，附加文件1）.只有新鲜的种子和种子脱水至24.5％达到50％的萌发。

在实验储存，可行性美国果范围从0到100%。有一个高度显著的(P.< 0.0001)贮藏环境温度与贮藏时间的交互作用对种子活力和萌发的影响。随着贮藏温度的降低和贮藏时间的延长，种子活力和萌发率均呈下降趋势。3.A和B，附加文件2）.0°C的种子贮藏是非常不利的Synsepalum dulcificum.无论存储持续时间如何。数据还表明，低温（4°C）的储存将种子活力降低到7天内的一半，而在靠近环境条件（25°C）的温度下储存的一半种子仍然在21天储存时保护其活力。在4℃/ 10°C储存的种子7天后，在储存在4°C / 10℃的种子后，活力在所有种子批次中丢失，而储存在25°C时的储存，可生存率和发芽几乎是零。虽然更突然，萌发减少的趋势与活力减少相当（图。3.B).在25°C或10°C储藏最多一周的种子的发芽率最高。

干燥敏感性的概率[P（D-S）]由种皮比-种子干质量(SCR-SM)模型得到的种子干质量范围为0.76 ~ 0.871）.尽管幼树(3年生，树高45-50厘米)种子的P(D-S)略高，但种子来源和母株生长阶段都没有影响其对干燥敏感概率的趋势(P.> 0.05)。

脱水和储存温度和持续时间对萌发率的影响Synsepalum dulcificum.

采用平均萌发时间(MGT)、首次萌发时间(TFG)和50%萌发时间(T_50.）.

脱水的影响非常显着（P.< 0.01)，极显著(P. <  0.001) on MGT and T_50.．事实上，播种后平均22.4±0.55天和22.6±2.47天首次萌发，分别发生在新鲜种子和脱水至24.5%的种子中。(无花果。4.一个额外的文件3.）.种子脱水至20％m。C。花了更多的时间来发芽，而不是脱水至24.5％的新鲜种子或种子（图。4.b，附加文件4.）.更重要的是，新鲜种子的萌发远比脱水种子更均匀(图。4.c,额外的文件5.）.达到50%发芽率的时间(T_50.）在脱水的种子（53.5±4.82天）几乎是新鲜种子的两倍（31±1.85天）。

模型简化表明贮藏温度和贮藏时间对发芽率没有显著的交互作用(P.> 0.05)。贮藏温度对初发芽率的影响不显著，贮藏时间对初发芽率的影响显著2）.贮藏温度和贮藏时间对MGT均有显著影响。种子在较高温度(10°C和25°C)下萌发较快，萌发时间较短(最多7天)。贮藏温度对种子萌发至50%的时间(T_50.）并不重要，而相比之下，储存持续时间对T具有非常显着和负面影响_50.（P. < 0.0001) (Table2）.

脱水和储存温度和持续时间对幼苗生长的影响美国果

发芽60天后，新鲜种子产生的幼苗在地面上的茎粗、高度和叶片数(36.6%)显著低于脱水种子(36.6%)。P.< 0.001)(表3.）.然而，在生长参数中没有观察到显着差异（P. > 0.05) between seedlings produced with seeds dehydrated to 24.50% m.c. and seedling produced with seeds dehydrated to 20% m.c.

贮藏时间与贮藏温度对苗径、苗高和叶数无互作效应(P > 0.05)。贮藏时间对幼苗生长无显著影响(P > 0.05)。仅贮藏温度对苗径和苗高的影响显著。总体而言，低温贮藏的种子组幼苗生长不良。无论种子贮藏条件如何，产叶数均无显著差异(表1)3.）.

水果的颜色在美国果接着是种子活力的提高。这种改善从发黄期开始观察，在果实完全成熟(红色)时更为显著。萌发率、萌发初发时间、平均萌发时间等参数对红果的萌发效果最好。这些结果表明，果实颜色是种子成熟的可靠指标美国果，这在其他物种中也可以观察到。例如，从黄色外观到棕色外观表明种子在种子中成熟vitis ViniferaL. cv设拉子[29]，并通过提高萌发性能来说明。同样，Manonmani和Vanangamudi [30.]强调通过的果实圣塔卢姆专辑从红棕色到黑色表明种子成熟，黑色果实的种子比其他颜色果实的种子萌发率高。值得注意的是美国果，果实颜色通过在花波素后70-74天发生完全红色[44]．开花后较长的时间保证了种子的成熟，而低的标准误差说明完全红色的果实促进了种子的同质成熟美国果．

我们在这项研究中证明美国果是真正是一种顽固的种子种类。迄今为止，是否美国果表现出的顽强只不过是道听途说。Hong和Ellis [3.]的报道称，抗性品种的种子通常在含水量为30%的情况下收获，在含水量低于12-10%的情况下很少存活。在本研究中，初始含水率为美国果(36.6%)反映了反抗行为。这种顽强的行为也得到了一个事实的支持，那就是美国果不能存活在10%水分含量以下(例如9.5和5.1%)。此外，基于SCR-SM模型，我们观察到，该物种的干燥敏感性概率[P(D-S)]始终高于正统物种和顽固物种之间的阈值0.5。据道斯等人[19]，抗性种的P(D-S)值均大于0.5。因此，scl - sm模型和实验方法得到了相似的结论。Joshi等人以前也使用过这种方法的组合。20.]澄清中间存储行为Mesua ferrea此外，干燥敏感性的概率范围在美国果[0.76;0.87]与其他Sapotaceae物种中观察到的那些相当[19),如Vitellaria paradoxaC.F.Gaertn [P(D-S) = 0.91]和Pouteria sapota(Jacq)。H.E.Moore & Stearn [P(D-S) = 0.73]，支持sapapotacae科的高抗性表现假说。此外，据报道，抗性种子被肉质或多汁的菱形层和不透水的种皮所覆盖[31]．这支持我们的观察美国果白肉覆盖闪亮的测试（图。5.A和B）。

根据Huang等人。[32]，种子含水量和贮藏温度对保持种子活力和活力起着决定性的作用。此外，我们发现存储时间是另一个重要的因素。特别是对于果,超过3周的储存对于种子活力和萌发百分比有害[33]．在美国果在其他物种中还报道了以下脱水后，含水量低于20％的水分含量Vitellaria paradoxaC.F.Gaertn,Cordyla pinnata（LEPR。EX A.RICH。）MILNE-REDH。和萨巴senegalensis (A.DC)。他们都被归为顽固派。

尽管美国果对低温(例如10°C或4°C)短期贮藏(最多7天)表现出一定的耐受性，在接近环境条件(25°C)的温度下贮藏种子获得最高活力和萌发率。这与10°C及以上是热带本地种种子的最佳储存温度的迹象一致[3.那34]．

脱水和贮藏对种子活力的影响从一种到另一种有很大的差异，特别是在抗性品种内。例如，脱水减少了发芽的平均时间Podocarpus henkelii.stapf ex dallim。＆b.d.jacks和Trichilia emetica瓦尔，它增加了它Trichilia dregeana归所。[35]．在……的情况下美国果脱水使种子萌发时间延长，特别是萌发到50%的时间延长，从而降低了种子活力。贮藏温度低于10℃，贮藏时间超过2周，种子活力显著降低。种子活力和发芽率对脱水和贮藏环境也有类似的反应美国果．

大多数关于种子脱水和植物种类储存的研究，特别是甲醛种植物种[36那37那38]将他们的结论缩小到种子的活力和萌发，有时是种子的活力。他们经常忽视种子脱水如何影响随后的幼苗表现，尽管事实上幼苗活力是决定任何植物物种生存、功能和生产特性的因素[39]．在本研究中，脱水种子产生的幼苗比新鲜种子产生的幼苗更有活力。这一观察结果与Omran等人的发现相吻合。40在木麻黄cunninghamiana进行筛选。和C. glauca.员工Spreng交货。但与Michalak等人的观察结果相矛盾。4.在Pyrus普通的辅助变流器。ib。脱水的种子生长缓慢。此外，已知幼苗生长受到许多因素的影响，包括赤霉素和脱落酸比例[41这也会受到水分胁迫和储存时间的影响。赤霉素对幼苗生长有促进作用，而脱落酸则有抑制作用[42]．大多数与植物生长调节剂(如功能、调节剂含量、副作用)有关的实验，通常以正性品种作为模型[43]．因此，这些生长调节剂的功能模式在其他植物基团中难以难以捉摸，特别是甲醛种植物种。在果,我们可以推出种子脱水可能会增加促进激素在生长抑制剂上的生长比率，导致更大的幼苗。

本研究首次提供数据，建立证据的顽固性神秘果。结果还表明，脱水和低温贮藏一方面降低了种子活力，另一方面提高了种子的成苗性能，但低温贮藏抑制了幼苗的生长。基于这些发现，低温保存应考虑长期保存美国果种子。

我们首先通过比较不同成熟度阶段(即不同颜色的果实)的萌发性能来确定适合用于实验的种子成熟期。果实成熟期分为果实全绿、果实全黄、果实全红三个阶段，分别对应于开花后35-40天、60-65天和70-74天的果实发育阶段(Tchokponhoué et al. [44]）被比较了。对于每个阶段，每个种子的五种复制每种种子用于萌发试验。这三种果实颜色的最佳表现被认为是确保足够的种子成熟的合适的果实开发阶段，并且仅考虑来自该水果颜色组的种子来研究种子储存行为。

阐明种子储存行为美国果，我们结合了Hong和Ellis提出的实验协议[3.[Daws等人提出的概率预测模型。[19]．为了确定脱水、贮藏温度和贮藏时间对种子活力和幼苗生长性能的影响，比较了各试验因素对种子发芽率和幼苗活力的影响。

种子收藏

本研究使用的种子是在Abomey-Calavi(6°25′n;2°20本部),Klouekanmey(07年°3’;01 49°本部),Sehoue(6°92镑;东经2°27′)、西经06°45′;东经02°06′)，均位于贝宁的几内亚植物地理区域。成熟而成熟(红色)的果实美国果在Klouekanmey, Sèhouè和Sey地区，每个地方都从一棵母树上手工收获，而在Abomey-Calavi地区，从三个不同的早果幼树上收获果实。在Abomey-Calavi收获的三棵树每棵都有10米的距离。每批水果都装在一个单独贴上标签的白色聚乙烯袋子里，运到贝宁共和国Abomey-Calavi大学遗传、园艺和种子科学实验室。每一批种子都是通过轻轻去除成熟果实的红色外果皮和白色果肉来提取的。然后用自来水冲洗种子，用干净的毛巾擦拭。试验在果实收获后8 h内自动启动。整个研究使用Sèhouè收集的种子(实验方法和scl - sm模型都使用)，而概率预测模型(scl - sm模型)只使用其他地方的种子。

种子贮藏行为:实验方法

只有来自Sèhouè的种子被用于实验方法。

种子质量和水分含量

使用数字平衡（Ohaus，型号：PA512，Item Nuest：80251571，澳大利亚Portalial），将每种新种种子的四次重复称为最接近的0.01克。为了确定脱落时的种子水分含量，我们烤箱（纽伦，型号：Fn 055，Ankara，土耳其） - 将五个样品为20个新的种子，每种新种子的样品在120℃至恒定质量。初始水分含量基于鲜重（F.WT）计算。

种子脱水对种子活力，萌发率和幼苗生长的影响

我们分成四批，每批150颗新鲜种子。每个批次最初用数字天平称到最接近的0.001克。每个种子批次在实验室环境温度(25-27℃，70% RH)下风干到所需的含水量(24.5,20,9.5和5.1%)。根据eq.(1)监测每个样品的期望含水率[3.]．

通过MCD是所需的水分含量，MCI初始含水量并呈现初始种子批量。

当种子批次达到靶水分含量时，我们在进一步描述的实验设计中比较了脱水种子批次和新鲜种子批次（在初始M.C中的种子）中随后的幼苗生长。

低温储存对种子活力，萌发百分比和速率的影响，以及幼苗生长

我们随机分配了4个贮藏温度(25°C、10°C、4°C和0°C)和5个贮藏时间(3、7、14、21和28天)给每批100粒种子。每批种子都密封地储存在一个小的封闭的白色塑料容器中。在试验贮藏后，采用试验设计对每个批次的活力、发芽率、发芽率以及随后的幼苗生长情况进行评估。

种子活力，萌发百分比和速率和幼苗生长试验的实验设计

本研究首先采用简单设计方法，研究了种子含水率对种子活力、种子发芽率和幼苗生长的影响果。比较了5个处理(初始含水率24.5%、20%、9.5%和5.1%)的种子含水率。每个含水量处理重复5次，每个重复20粒种子。此外，采用完全随机析因设计评价贮藏温度和贮藏时间的影响。4种贮藏温度和5种贮藏时间的因子组合共导致20个处理。每个处理重复5次，每个重复20粒种子。所有处理的种子水平播种，在0.75 l的聚苯乙烯苗圃袋中，土壤从0-10 cm的水平深度收集(并通过加热杀菌以减少微生物污染)，通过定期浇水(每天两次)使土壤饱和，以保持足够的土壤水分。

数据收集

从播期开始，连续60天每天记录种子萌发情况。在美国果在美国，当种子的胚根突出，并伴随着完全的代谢活化，使种子从土壤中可见时，就被认为是发芽了。在60^th播种后，我们在所有治疗中对非发芽种子进行了吸收的种子压碎试验（一种可靠替代的四唑污染活力测试），以将活种子（仍然活着）与死亡人员分开[45]．在……的情况下美国果结果表明，死种子的胚呈黄色或褐色，微压后萎陷，有腐烂气味;活种子的胚呈绿色或白色，受压后结实。在60℃时，对发芽种子的幼苗生长(直径、高度和叶片产量)进行了监测^th天发芽。

种子贮藏行为:基于SCR-SM的概率模型

使用了四种种子序列：Abomey-Calavi，Klouekanmey，Sthouè和Sey。对于每个出处，我们根据DAWS等人产生重核[P（D-S）]的概率。[19]遵循eq。（2）。

P(D-S)为该物种的种子具有抗性的概率，一种是种子涂层比（SCR）和B.的日志₁₀[种子干质量(g)]。确定参数一种和B.我们使用了10种种子(超过Daws等人推荐的8种种子[19]）每种出处的母亲树。为了确定种子涂层比，我们首先将所有种子的种子涂层和蛋白分离，然后在120℃下烘箱干燥每种组分至恒定质量。

数据分析

为每种治疗计算活力（VP）和发芽（GP）百分比，而使用次级发芽（TFG）的时间评估萌发率[46，平均萌发时间(MGT) [47和50%萌发时间(T_50.)[48]．该后一种参数仅针对记录至少50％发芽的处理确定。VP，GP和MGT分别计算为：

一步法是non-germinated种子的数量还活着在治疗p种子吸胀后粉碎试验,Ngp发芽的种子数治疗p, N的总数种子播种在治疗(这里100种子为每个治疗),t_一世发芽试验开始至今的时间是i，和n吗_GPI.第一次萌发的时间(TFG)以重复中第一个种子萌发的时间和T_50.这一天，50%的种子在每次复制中发芽。

为了评估脱水和储存温度与储存持续时间之间的相互作用效果在生存能力和萌发百分比之间的效果，我们使用了具有二项式误差结构或准二页误差结构的广义线性模型（GLM）（以考虑过度分散） 在必要时。评估相同参数对萌发率的影响（TFG，MGT和T._50.)，我们在必要时使用具有泊松误差结构或负二项误差结构的glm(以解释过度分散)。对于glm模型，当观察到显著差异时，我们使用Tukey HSD检验来分离平均值。我们使用对比分析或SNK试验所描述的方差分析来强调处理对2月龄幼苗直径和高生长的影响。为了分析不同处理对2月龄幼苗叶片产量的影响，我们采用了拟泊松误差结构的glm模型。我们用二项式检验来检验种子来源和母株生长阶段是否会导致物种的抗性概率存在显著差异．所有分析均在r [49]（3.3.2版）通过rstudio [50.](版本1.044)使用“agricolae”，“gdata”，“MASS”“multicomp”包，除了基本包。结果以平均±标准误差(s.e.)表示。

GP：

萌发百分比

本:

平均发芽时间

P（D-S）：

Dessication-敏感性的概率

SCR-SM:

种皮比-种子干质量

T50：

时间达到50％的萌芽

过渡政府:

第一次发芽的时间

VP：

生存能力的百分比

我们感谢Carlos A. Houdégbé， Chaldia A. Agossou, Lys A. Aglinglo, Eric C. Legba, Mireille Sohou和Carmen Bonou在实验过程中提供的宝贵帮助。作者也在债务太太琼Kisito Chabi梅花鹿和马赛厄斯同时Laboratoire说起Controle de la质量防疫线des小病痛,波林先生Sedah Laboratoire de Genetique et des的生物技术和Issiakou Houssoukpevi Laboratoire des科学du索尔Abomey-Calavi大学的。

资金

这得到了贝宁新联盟信托基金的财政支持。RGNAT03/14)。

可用性数据和材料

支持本文结论的数据集包含在文章和其他文件中。

从属关系

1. 贝宁共和国Abomey-Calavi大学农学院植物科学学院遗传、园艺和种子科学实验室

   Dèdéou启示Tchokponhoué， Sognigbé N 'Danikou & Enoch Gbènato Achigan-Dako

贡献

DAT, SN和EAD设计了实验。DAT进行了实验。DAT写了这篇文章。DAT, SN, EAD对文章进行了修改。所有作者阅读并批准最终稿件。

相应的作者

对应到Dedeou天启Tchokponhoue．

伦理批准和同意参与

不适用。

同意出版物

不适用。

利益争夺

提交人声明他们没有竞争利益。

出版商的注意

Springer Nature在发表地图和机构附属机构中的司法管辖权索赔方面仍然是中立的。

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